[发明专利]一种血清总铁结合力检测试剂盒及其配制方法和检测方法在审
| 申请号： | 201911267676.6 | 申请日： | 2019-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN111007023A | 公开（公告）日： | 2020-04-14 |
| 发明（设计）人： | 陈逸桐;戴俊;靳峰;刘宏婧;吴凯杰;李园园;王晖;郑丽丽 | 申请（专利权）人： | 天津中成佳益生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N21/31 | 分类号： | G01N21/31;G01N21/78;G01N21/82 |
| 代理公司： | 北京易正达专利代理有限公司 11518 | 代理人： | 陈桂兰 |
| 地址： | 300000 天津市东丽区华*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 血清 结合 检测 试剂盒 及其 配制 方法 | ||
1.一种血清总铁结合力检测试剂盒，其特征在于包括四个独立的试剂R1、R2、R3和R4，其中：
试剂R1的组成及各组分的含量为：
试剂R2的组成及各组分的含量为：
试剂R3的组成及各组分的含量为：
试剂R4的组成及各组分的含量为：
2.根据权利要求1所述的血清总铁结合力检测试剂盒，其特征在于试剂R1的pH为8-10，试剂R2的pH为5-7，试剂R3的PH为8-10，试剂R4的PH为5-7；
优选地，试剂R1与试剂R2的体积比为2～6:1，试剂R3与试剂R4的体积比为2～6:1，进一步优选地，试剂R1与试剂R2最佳体积比为5:1，试剂R3与试剂R4最佳体积比为5:1。
3.根据权利要求2所述的血清总铁结合力检测试剂盒，其特征在于试剂R1的缓冲液为氢氧化钠和甘氨酸组成的缓冲液或Tris缓冲液，试剂R2的缓冲液为乙酸缓冲液或柠檬酸缓冲液，试剂R3的缓冲液为碳酸氢钠和三羟甲基氨基甲烷组成的缓冲液，或为碳酸钠和碳酸氢钠组成的缓冲液，试剂R4的缓冲液为乙酸缓冲液或柠檬酸缓冲液；
优选地，试剂R1和试剂R3的表面活性剂为曲拉通系列或吐温系列的一种或多种；
优选地，试剂R2所用的螯合剂为乙二胺四乙酸二钠或EGTA；
优选地，试剂R2和试剂R4所用的稳定剂选自聚蔗糖系列，BSA，PEG系列中的一种或多种；
优选地，试剂R3、试剂R4中的抗干扰剂选自硫脲、氨基硫脲、N,N-二甲基硫脲和异硫脲中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的血清总铁结合力检测试剂盒，其特征在于试剂R1的缓冲液组分为氢氧化钠3-4g/L，甘氨酸6-8g/L；试剂R3的缓冲液组分为碳酸氢钠12-13g/L，三羟甲基氨基甲烷或碳酸钠36-37g/L。
5.一种血清总铁结合力检测试剂盒的配制方法，其特征在于包括以下步骤：先用纯化水分别配制试剂R1、R2、R3、R4的缓冲液，再按照试剂R1、R2、R3、R4中各组分的含量添加其他物质，混合均匀后用HCL或者NaOH调节其PH，使得试剂R1的pH为8-10，试剂R2的pH为5-7，试剂R3的PH为8-10，试剂R4的PH为5-7，得到所需总铁结合力的检测试剂盒。
6.根据权利要求5所述的配制方法，其特征在于试剂R1的配制包括如下步骤：
按照试剂R1的含量将缓冲液组分溶于纯化水，搅拌均匀，配制得R1缓冲液，再按照试剂R1其他组分的含量将盐酸羟胺、表面活性剂、氯化铟依次溶于制得的R1缓冲液中，混合均匀后用HCL或者NaOH调节PH至8-10。
7.根据权利要求5所述的配制方法，其特征在于试剂R2的配制包括如下步骤：
按照试剂R2的含量将缓冲液组分溶于纯化水，搅拌均匀，配制得R2缓冲液，再按照试剂R2其他组分的含量将3-(2-吡啶基)-5,6-二(2-呋喃基)-1,2,4-三嗪-5′,5″-二磺酸二钠盐、螯合剂、稳定剂溶于制得的R2缓冲液中，混合均匀后用HCL或者NaOH调节其PH至5-7。
8.根据权利要求5所述的配制方法，其特征在于试剂R3的配制包括如下步骤：
按照试剂R3的含量将缓冲液组分溶于纯化水，搅拌均匀，配制得R3缓冲液，再按照试剂R3其他组分的含量将表面活性剂、抗干扰剂、三氯化铁溶于制得的R3缓冲液中，混合均匀后用HCL或者NaOH调节其PH至8-10。
9.根据权利要求5所述的配制方法，其特征在于试剂R4的配制包括如下步骤：
按照试剂R4的含量将缓冲液组分溶于纯化水，搅拌均匀，配制得R4缓冲液，再按照试剂R4其他组分的含量将抗坏血酸、盐酸羟胺、1-氧代-2-羟基吡啶、抗干扰剂、稳定剂、3-(2-吡啶基)-5,6-二(2-呋喃基)-1,2,4-三嗪-5′,5″-二磺酸二钠盐溶于制得的R4缓冲液中，混合均匀后用HCL或者NaOH调节其PH至5-7。
10.一种血清总铁结合力的检测方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤1：Fe的浓度测试
将校准品、纯化水或待测样本20μl与200μl试剂R1混合，37℃孵育5min后，在主波长600nm处读取其吸光度A1校准、A1空白或A1样本；加入40μl试剂R2混合均匀，37℃孵育5min后在主波长600nm处读取其吸光度A2校准、A2空白或A2样本；
步骤2：UIBC的浓度测试
进行UIBC浓度测试时，将校准品、纯化水或待测样本20μl与200μl试剂R3混合，37℃孵育5min后，在主波长600nm处读取其吸光度A1校准、A1空白或A1样本，加入40μl试剂R4混合均匀，37℃孵育5min后在主波长600nm处读取其吸光度A2校准、A2空白或A2样本；
步骤3：待测样本血清总铁结合力TIBC浓度的计算，计算公式为：TIBC＝Fe+UIBC，其中：
Fe或
式中，△A校准＝A校准-A空白；△A样本＝A样本-A空白；
A校准＝A2校准-A1校准；A样本＝A2样本-A1样本；A空白＝A2空白-A1空白。
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