[发明专利]一种耐硫酸铵的木糖苷酶突变体V322DH328DT329E

说明书

本发明涉及基因工程及蛋白质改造技术领域，公开了一种耐硫酸铵的木糖苷酶突变体V322DH328DT329E，突变体V322DH328DT329E的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。经15.0～30.0％(w/v)的KCl、Na₂SO₄和(NH₄)₂SO₄处理60min后，V322DH328DT329E的活性分别为63～85％、60～81％和99～107％。本发明的耐硫酸铵的木糖苷酶突变体V322DH328DT329E可应用于农业、制革、污水处理等行业。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及蛋白质改造技术，具体为一种耐硫酸铵的木糖苷酶突变体V322DH328DT329E。

背景技术

木聚糖是一种半纤维素，广泛存在于植物的细胞壁中，在高等植物和农业废料中约占干重的20％。内切木聚糖酶(endo-1,4-β-D-xyla nase，EC 3.2.1.8)作用于木聚糖的主链骨架，可随机地切割木聚糖从而生成低聚木糖，木糖苷酶(β-D-xylosidase，EC3.2.1.37)可将低聚木糖水解为木糖(Collins et al.FEMS Microbiology Reviews,2005,29:3～23.)，木糖可作为微生物等生物利用的碳源，或作为原料生产乙醇、乳酸、木糖醇等。

除了木聚糖外，植物的糖蛋白中也含有木糖，其可被木糖苷酶降解(Leszczuk etal.Plant Physiology and Biochemistry,2019,139:681～690.)；此外，广泛存在于动物体内的蛋白聚糖也含有木糖，其也可被木糖苷酶降解(Takagaki et al.The JournalofBiological Chemistry,1990,265:854～860.)。

盐广泛存在于在自然界和各种生产实践中，包括农业、制革、污水、洗涤、食品、造纸等。例如，氯化钾和硫酸铵是在农业种植中应用相对广泛的一种化肥；在皮革软化过程中，需要添加硫酸钠，在此过程中加入木聚糖酶，可达到促进皮纤维松散，提高成品革的柔软度、手感和物理机械性能的效果(专利：ZL201710574969.3)。不耐盐的木糖苷酶将无法和化肥同时施用，不利于降解农业废料中的低聚木糖，从而导致木聚糖的循环利用降低，进一步导致土壤肥力降低。由于高盐浓度下的盐析作用，大部分的酶在高盐浓度下不具有良好的催化活性。因此，为了使酶在高盐环境生物技术领域具有更好的应用性，需要提高酶在盐中的稳定性。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的旨在提供耐硫酸铵的木糖苷酶突变体V322DH328DT329E，V322DH328DT329E可应用于农业、制革、污水处理等行业。

为了达到上述技术目的，本发明具体通过以下技术方案实现：

本发明通过蛋白质改造技术，设计了耐硫酸铵的木糖苷酶突变体V322DH328DT329E，所述的突变体V322DH328DT329E的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，与GenBank记录的木糖苷酶序列AQM74402(SEQ ID NO.3)相比，V322DH328DT329E的第322位、328位和329位氨基酸分别为天冬氨酸、天冬氨酸和谷氨酸，而AQM74402的第322位、328位和329位氨基酸分别为缬氨酸、组氨酸和苏氨酸。