[发明专利]一种穿黄制剂指纹图谱及组分含量测定方法

权利要求书

1.一种穿黄制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.供试品溶液的制备：取1.0g穿黄制剂粉末，精密称定，置于25mL容量瓶中，加入70％甲醇20mL，超声30min，放冷，定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，13000r·min^-1离心，取上清液过0.45μm微孔滤膜，即得；

S2.高效液相色谱检测：吸取上述步骤S1所得供试品溶液，注入高效液相色谱仪中进行高效液相色谱检测，记录65min内的指纹图谱；

其中，指纹色谱条件为：

采用Agilent Technologies EC-C18色谱柱，4.6mm×250mm，4μm，流动相：乙腈-0.2％磷酸水溶液系统；采用梯度洗脱方式：0min→10min→15min→20min→30min→40min→50min→65min；乙腈10％→15％→21％→25％→28％→34％→36％；流速1.0mL·min^-1；双波长切换时间序列采样：0～35min，323nm；35～65min，215nm；进样量5μL；柱温25℃；分析时间65min；理论塔板数以异绿原酸C峰计算不低于41000。

2.根据权利要求1所述一种穿黄制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述穿黄制剂粉末的制备方法如下：取穿黄清热片，去掉薄膜衣，研细过五号筛。

3.根据权利要求1所述一种穿黄制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述穿黄制剂粉末的制备方法如下：取穿黄清热胶囊，倾出内容物，研细过五号筛。

4.一种如权利要求1-3任一项所述指纹图谱用于穿黄制剂的组分含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.混合对照品溶液的制备：精密称取各对照品适量，分置于10个5mL的量瓶中，加甲醇溶解并定容，分别制得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的对照品储备液；取上述各对照品储备液适量，置于同一个5ml量瓶中，加甲醇稀释到刻度，摇匀，制成含上述各对照品浓度分别为0.184、0.258、0.202、0.260、0.178、0.0934、0.652、1.034、0.234、1.132mg·mL^-1的混合对照品储备液，精密吸取混合对照品储备液0.5mL，置于2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成含新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯浓度分别为0.0460，0.0645，0.0505，0.0650，0.0445，0.0234，0.163，0.258，0.0585，0.283mg·mL^-1的混合对照品溶液，即得；

S2.供试品溶液的制备：取1.0g穿黄制剂粉末，精密称定，置于25mL容量瓶中，加入70％甲醇20mL，超声30min，放冷，定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，13000r·min^-1离心，取上清液过0.45μm微孔滤膜，即得；

S3.色谱条件选择及系统适应性试验：采用Agilent Technologies EC-C18色谱柱，4.6mm×250mm，4μm，流动相：乙腈-0.2％磷酸水溶液系统；采用梯度洗脱方式：0min→10min→15min→20min→30min→40min→50min→65min；乙腈10％→15％→21％→25％→28％→34％→36％；流速1.0mL·min^-1；双波长切换时间序列采样：0～35min，323nm；35～65min，215nm；进样量5μL；柱温25℃；分析时间65min；理论塔板数以异绿原酸C峰计算不低于41000；

S4.吸取对照品溶液和供试品溶液各1～5μL，注入液相色谱仪，测定各组份相应峰面积，按外标法计算，即得不同批号穿黄制剂中10种主要成分的含量。

5.根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述穿黄制剂粉末的制备方法如下：取穿黄清热片，去掉薄膜衣，研细过五号筛。