[发明专利]一种抗衰老剂的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种抗衰老剂的制备方法及其应用，其特征在于，所述抗衰老剂以健康新生儿脐带为原料，按照下述步骤准备：

a)提取间充质干细胞；

b)将所述间充质干细胞在血清培养基中培养至融合达40〜50%的单层细胞；

c)在所述单层细胞中加入浓度25〜55mmol/L的葡萄糖溶液制成目标培养基；

d)将所述目标培养基继续培养46〜50小时后制成预备培养基；

e)将所述预备培养基浓缩纯化；

所述a）步骤中，取新鲜足月健康胎儿脐带，用生理盐水冲洗血渍、剥离、剪成小块，均匀涂布， 缓慢加入10〜15mL无血清培养基，在培养箱中培养，将原代细胞培养7〜10天后，更换无血清培养液，培养至细胞达到70%以上的融合形成脐带间充质干细胞，移去无血清培养液，添加适量的胰蛋白酶-乙二胺四乙酸钠(EDTA)消化l分钟，使脐带间充质干细胞收缩脱离瓶壁，此时加入先前移去的培养上清液，并使用移液管轻轻吹打，将脐带间充质干细胞悬液移入50mL离心管，离心，去除上清液，重新加入无血清培养基将脐带间充质干细胞重悬，并计数，按此方法传代培养；

所述b)步骤中，在所述脐带间充质干细胞的第3代细胞加入含有5〜10%氨基酸的血清中培养至40〜50%单层细胞；

所述c)步骤中，在所述单层细胞中加入葡萄糖溶液，所述葡萄糖浓度为25〜55mmol/L，制成目标培养基；

所述d）步骤中，将所述目标培养基继续培养46〜52小时后，使用过滤器过滤，制成预备培养基；

所述e）步骤中，将所述预备培养基烘干，浓缩提纯。

2.根据权利要求1所述的一种抗衰老剂的制备方法及其应用，其特征在于，所述生理盐水为浓度50〜100ug/mL之间的青霉素和链霉素。

3.根据权利要求1所述的一种抗衰老剂的制备方法及其应用，其特征在于，所述培养箱内培养条件为温度37°C、二氧化碳体积分数为5%，饱和湿度为95%。

4.根据权利要求1所述的一种抗衰老剂的制备方法及其应用，其特征在于，所述胰蛋白酶-乙二胺四乙酸钠(EDTA)质量比例为0.1〜0.2。

5.根据权利要求1所述的一种抗衰老剂的制备方法及其应用，其特征在于，所述过滤器目数为0.15〜0.25wn。