[发明专利]一种抗衰老剂的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种抗衰老剂的制备方法及其应用，所述抗衰老剂以健康新生儿脐带为原料，按照下述步骤准备：a)提取间充质干细胞；b）将所述间充质干细胞在无血清培养基中培养至融合达40〜50%的单层细胞；c)在所述的单层细胞中加入终浓度25〜55mmol/L的葡萄糖溶液制成混合液；d)将所述混合液继续培养46〜50小时后制成预备培养基，e)将所述培养基浓缩纯化，本发明制备的抗衰老剂可以有效缓解皮肤性衰老和皮肤抗氧化。

技术领域

本发明涉及一种干细胞抗衰老领域，尤其是涉及一种抗衰老剂的制备方法及其应用。

背景技术

随着人口老龄化问题的日益突出，抗衰老领域成为全球关注的焦点。皮肤是人体最大的器官，担负着保护、感觉、调节体温、分泌、排泄和免疫等诸多方面的作用，但随着年龄的增长，皮肤会发生退行性变，例如，皮肤变薄、含水量减少、弹性消退、萎缩、起皱，随之皱纹、老年斑等临床症状的出现，使人意识到自己开始衰老，这对人们的生活、工作有着复杂的心理与生理影响，它可以引发焦虑、抑郁、自卑等一系列的心理问题。因此，抗衰老治疗，尤其是对皮肤的抗衰老治疗成为研究的焦点之一，人们希望通过抗衰老治疗来改善和提高生活质量。

皮肤衰老是一个漫长而复杂的演变过程。内在因素表现为，例如随着年龄增加细胞端粒逐渐缩短，而有氧细胞代谢所引起的氧化损伤却逐渐增多。具体表现为皮肤表皮层和真皮层变薄、血管壁变薄、真皮层成纤维细胞数量减少和功能紊乱、胶原纤维合成速度逐渐减慢。外在因素包括生活方式、营养状况、环境因素等。其中，日光中紫外线所引起的光损伤(photodamage)是导致皮肤衰老的主要环境因素。随着生活水平的提高，和现代生物及医学的飞速发展，尤其是干细胞技术的出现，通过活化皮肤细胞、促进皮肤干细胞增殖、分化，可修复或替代衰老的皮肤细胞，最终从根本上改变皮肤的生理机能变为可能，本发明利用新生婴儿脐带培养脐带间充质干细胞已达到延缓衰老的目的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种抗衰老剂的制备方法及其应用，从而解决上述问题。

为实现上述目的，针对上述问题，本发明提供如下技术方案一种抗衰老剂的制备方法及其应用，所述抗衰老剂以健康新生儿脐带为原料，按照下述步骤准备：

a)提取间充质干细胞；

b)将所述间充质干细胞在血清培养基中培养至融合达40〜50%的单层细胞；

c)在所述单层细胞中加入浓度25〜55mmol/L的葡萄糖溶液制成目标培养基；

d)将所述目标培养基继续培养46〜50小时后制成预备培养基；

e)将所述预备培养基浓缩纯化；

所述a）步骤中，取新鲜足月健康胎儿脐带，用生理盐水冲洗血渍、剥离、剪成小块，均匀涂布，缓慢加入10〜15mL无血清培养基，在培养箱中培养，将原代细胞培养7〜10天后，更换无血清培养液，培养至细胞达到70%以上的融合形成脐带间充质干细胞，移去无血清培养液，添加适量的胰蛋白酶-乙二胺四乙酸钠(EDTA)消化l分钟，使脐带间充质干细胞收缩脱离瓶壁，此时加入先前移去的培养上清液，并使用移液管轻轻吹打，将脐带间充质干细胞悬液移入50mL离心管，离心，去除上清液，重新加入无血清培养基将脐带间充质干细胞重悬，并计数，按此方法传代培养；

所述b)步骤中，在所述脐带间充质干细胞的第3代细胞加入含有5〜10%氨基酸的血清中培养至40〜50%单层细胞；

所述c)步骤中，在所述单层细胞中加入葡萄糖溶液，所述葡萄糖浓度为25〜55mmol/L，制成目标培养基；

所述d）步骤中，将所述目标培养基继续培养46〜52小时后，使用过滤器过滤，制成预备培养基；

所述e）步骤中，将所述预备培养基烘干，浓缩提纯。

优选的，所述生理盐水为浓度在50〜100ug/mL之间的青霉素和链霉素。

优选的，所述培养箱内培养条件为温度37°C、二氧化碳体积分数为5%，饱和湿度为95%。