[发明专利]一种重组马血清白蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种重组马血清白蛋白及其制备方法，将经过密码子优化的编码马血清白蛋白的核苷酸序列（如SEQ ID NO:2所示）构建入真核细胞诱导表达载体中，然后转入真核细胞进行培养后诱导表达，并进行纯化，从而获得所述重组马血清白蛋白。此外本发明还公开了该重组马血清白蛋白在制备免疫马匹用的狂犬病疫苗中的应用。用本发明重组马血清白蛋白作为稳定剂的狂犬病抗原免疫马匹后获得高抗狂犬病毒抗体，未检测出抗人血清白蛋白的抗体。本发明获得的重组马血清白蛋白可以替代人血清白蛋白作为免疫马匹用狂犬病疫苗的稳定剂，用于生产高质量马抗人狂犬病毒血清。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及重组表达蛋白领域，具体是表达一种哺乳动物血浆蛋白，尤其涉及一种重组马血清白蛋白(Equine serum albumin, ESA)及其制备方法；此外，本发明还涉及采用上述方法获得的重组马血清白蛋白的应用。

背景技术

血清白蛋白是哺乳动物血浆内最主要的蛋白，在制药工业上被广泛用作为辅料或保护剂，以保护药品有效成分的稳定。许多病毒疫苗采用白蛋白作为保护剂。人狂犬病疫苗就是其中的一种。

狂犬病（Rabies）是狂犬病病毒（Rabies virus, RABV）引起的人和所有温血动物的急性致死性中枢神经系统（CNS）的自然疫源性疾病。本病呈全球性分布，人多因被患病动物咬伤而感染，同种和异种动物之间除通过咬伤传播以外，还可以通过吸入、食入或垂直传播等方式传播。人狂犬病患者几乎100%死亡。我国是狂犬病严重流行国家之一，加强狂犬病的研究和防治是十分迫切而又任重道远的。根据WHO对于狂犬病防治的指导原则，被疑似患病动物抓、咬伤后，立即或尽早进行暴露处理。除了需要注射狂犬病疫苗外，伤口处理后应立即或尽早局部浸润注射抗狂犬病毒免疫球蛋白，使机体获得保护。

抗人狂犬病免疫球蛋白是用人用狂犬病疫苗免疫马匹后，采血加工制备而成。由于人用狂犬病疫苗在制备过程中添加人血清白蛋白，用之免疫马匹，马匹产生高滴度抗人血清白蛋白抗体，因而使抗血清成品中含有一定量的抗人血清白蛋白抗体，注射后容易产生致敏，过敏反应的几率非常高。为了克服这一问题，我们开发了马血清白蛋白的基因工程表达研究。用重组马血清白蛋白替代人血清白蛋白作为狂犬病毒疫苗的细胞培养生产病毒过程与疫苗原液中的保护剂，以避免上述的副作用。

申请人于2017年3月13日申请的发明专利CN201710147935公开了一种重组马Interferon-alpha-1的制备方法。在发明专利CN201710147935中，申请人采用酵母的α-交配因子（α-mating factor）的信号肽作为干扰素的信号肽，用于干扰素的分泌表达，取得良好效果。但是在马血清白蛋白的毕赤酵母分泌表达中，申请人发现用酵母的α-交配因子（α-mating factor）的信号肽作为白蛋白的信号肽，目的蛋白的表达量很低。

本研究的目的是采用毕赤酵母重组表达马血清白蛋白，以马血清白蛋白代替人血清白蛋白制备马用狂犬病毒疫苗。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一在于提供一种重组马血清白蛋白(Equine serumalbumin, ESA)的制备方法。

本发明要解决的技术问题之二在于提供一种上述方法制得的重组马血清白蛋白。

本发明要解决的技术问题之二在于提供一种上述重组马血清白蛋白的应用，将该重组马血清白蛋白作为稳定剂或保护剂用于制备免疫马匹用的狂犬病疫苗。本发明用重组马血清白蛋白替代人血清白蛋白作为狂犬病毒疫苗的细胞培养生产病毒过程与疫苗原液中的保护剂，以避免过敏反应的副作用。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：