[发明专利]特发性肺纤维化疾病诊断标志物及其制备诊断或预后工具中的应用

说明书

本发明公开了特发性肺纤维化疾病诊断标志物及其制备诊断或预后工具中的应用。本发明涉及细胞色素C氧化酶亚基5B（COX5B）作为特发性纤维化（IPF）患者血清标志物的新发现。COX5B是线粒体内膜上呼吸链复合体III的组成成分之一，在IPF患者血清中COX5B含量升高，说明IPF患者线粒体损伤严重，COX5B释放到血清中，并且COX5B在IPF患者血清中含量与生存（Overall Survival）负相关，生存差的IPF患者血清中COX5B含量较高。本发明的研究成果为临床上进行特发性肺纤维化疾病的诊断提供了一种无创的方法，适于临床推广。

技术领域

本发明属于医学诊断技术领域，具体涉及一种特发性肺纤维化疾病诊断标志物及其制备诊断或预后工具中的应用。

背景技术

特发性肺纤维化（IPF）是一种慢性进行性致死疾病，其病理学特点为肺实质破坏、肺泡上皮细胞表型显著变化、细胞外基质的沉积以及成纤维细胞异常增殖与积累。现在已知200多种原因可以引起特发性肺纤维化，如遗传性疾病、自身免疫性疾病、暴露于环境中有毒物质、药物和放射等。越来越多的证据表明，在肺纤维化的发生发展过程中，不仅广泛存在着个体间异质性（inter-heterogeneity）和个体内组织细胞的异质性（intra-heterogeneity），而且还广泛存在着个体在细胞和分子等各种层次的动态变化。当前对肺纤维化的发病机制研究发现与线粒体功能障碍密切相关。利用蛋白质组学的技术能更好地全面解析复杂疾病的机制、筛选疾病标志物、研究药物作用靶点、筛选特殊功能蛋白质等。已有的组学研究发现肺纤维化患者的血清中CCNA2、PBMC、CD28等的异常表达，蛋白质修饰主要体现在CDKN2B、CAR10、MGMT等的甲基化和CASZ1的超甲基化等，代谢组学结果表明腺苷三磷酸降解途径、糖酵解途径、谷胱甘肽生物合成途径和鸟氨酸转氨酶途径中均发生了明显的变化。据统计，全球每年约新增特发性肺纤维化患者500万人，预后较差，诊断后中位生存期为2-3年。特发性肺纤维化的病因不明确、诊断易混淆等特点，在临床上用于诊断特发性肺纤维化的手段往往缺乏特异性，迫切需要更高效、稳定的手段来预警或判断特发性肺纤维化。因此开发一种可用于准确诊断IPF的方法是亟待解决的问题。

细胞色素C氧化酶（COX）是线粒体呼吸链的末端酶。它是一种多亚基酶复合物，可将电子从细胞色素C转移到分子氧上，并促进跨线粒体内膜的质子电化学梯度。该复合物由13个线粒体和核编码亚基组成。线粒体编码的亚基执行电子转移和质子泵活动。核编码亚基的功能可能在复合物的调控和组装中发挥作用。该基因（COX5B）编码人线粒体呼吸链酶的核编码亚基Vb。在功能正常的线粒体中，该蛋白位于线粒体内膜上，当线粒体受到损伤，线粒体膜电位去极化，内外膜损伤，位于线粒体内膜的呼吸链复合体III解体，COX5B蛋白释放到血清中。

发明内容

本发明的目的是提供了一种特发性肺纤维化疾病诊断标志物及其制备诊断或预后工具中的应用，通过LC-MS/MS质谱的DIA方法检测到COX5B在特发性肺纤维化患者的血液中的含量比正常人高。COX5B蛋白是线粒体内膜上呼吸链复合体III的组成成分之一，在特发性肺纤维化患者血清中COX5B蛋白水平较高，说明IPF患者线粒体损伤严重，COX5B蛋白释放到血清中，并且COX5B蛋白水平与IPF患者生存OS负相关，生存差的IPF患者血清中COX5B蛋白水平较高，可以进一步开发诊断特发性肺纤维化疾病的工具。

本发明为实现上述目的采用如下技术方案，特发性肺纤维化疾病诊断标志物，其特征在于该诊断标志物为COX5B基因表达产物，COX5B基因的编码序列包括以下任一一种DNA序列：

（1）序列表中SEQ ID NO.2所示的DNA序列；

（2）在严格条件下与（1）限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；

（3）与（1）或（2）限定的DNA序列具有70%以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列。