[发明专利]Src酪氨酸激酶抑制剂在抑制炎症因子分泌中的应用

说明书

一种Src酪氨酸激酶抑制剂在抑制炎症因子分泌中的应用，属于生物工程技术领域，本发明以人单核细胞源巨噬细胞为研究对象，取细胞培养液并提取细胞的蛋白，同时Elisa检测检测细胞培养液中炎症因子的水平；以Westen‑blot检测炎症信号通路相关基因的激活水平；以Westen‑blot和酶活性分别检测Src蛋白水平和酶活性。Src酪氨酸激酶抑制剂有望可作为一种药物，在巨噬细胞炎症性疾病的缓解中具有应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及一种Src酪氨酸激酶抑制剂在抑制炎症因子分泌中的应用。

背景技术

炎症（inflammation）：是机体对于外界刺激的一种防御反应。分为感染性炎症和非感染性炎症。通常情况下，炎症是有益的，是人体的防御反应，但是一些情况下，炎症也是有害的，与多种疾病的发生有关，例如：心脏疾病，神经病，糖尿病等。

脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)又称为脂肪酸结合蛋白4 (FABP4)，是脂肪酸结合蛋白(FABPs)家族中的一员，能结合多种疏水性化合物，在脂肪和卵巢组织中分布广泛，参与脂肪酸的合成代谢，它可逆地结合细胞内的疏水配体，并将其运输到细胞的各个部分，从而在细胞脂质代谢和信号传导中发挥作用。它是一种胞质蛋白，在脂肪细胞和巨噬细胞中表达较多，并且在脂质代谢和炎症中发挥重要作用。在脂肪细胞中，FABP4通过介导脂肪分解和脂质再酯化，进而影响葡萄糖代谢；在巨噬细胞中，FABP4参与脂质代谢和炎症反应，有研究显示：敲除FABP4可抑制炎症反应，降低内质网应激，降低活化B细胞活化巨噬细胞的核因子kappa轻链增强因子。可见FABP4在局部巨噬细胞反应中起重要作用，但其分子机制尚不清楚。

酪氨酸Src通过酪氨酸位点的磷酸化而被激活，激活后可引起一些紧密和粘附蛋白的酪氨酸磷酸化。还被证明可以抑制紧密连接蛋白聚集。大量证据表明激酶活化参与多个器官急性损伤，包括脑缺血损伤、心肌梗塞、肝细胞损伤、急性肾损伤等。c-Src蛋白（是酪氨酸激酶Tyrosine protein kinase，TPK的一种）在肿瘤发生的早期在质膜下被激活，并传递致癌信号。一方面，研究显示：c-Src通过肉豆蔻酰化作用与细胞膜结合，从而将信号从细胞外传递到细胞内。另一方面，也有报道称c-Src不仅在质膜中定位和发挥作用，而且在内膜中也起作用。越来越多的研究把Src激酶被作为恶性肿瘤中抗肿瘤药物的一个作用靶点,将Src激酶抑制剂用于预防和治疗恶性肿瘤。但巨噬细胞中FABP4、c-Src与炎症信号通路之间的关系尚不清楚。Src激酶抑制剂PP2是一种吡唑并嘧啶复合物, 可有效抑制Src激酶。但到目前为止，还没有发现现有技术中对Src酪氨酸激酶抑制剂在抑制炎症因子分泌中的有效应用方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种减轻FABP4介导的免疫炎症反应的抑制剂，即Src酪氨酸激酶抑制剂在抑制炎症因子分泌中的应用方法。

本发明的具体技术方案为：

Src酪氨酸激酶抑制剂在抑制炎症因子分泌中的应用。

所述的炎症反应由FABP4所介导的；所述的Src抑制剂为PP2。

其应用流程包括以下步骤：

（1）培养正常的人单核细胞源巨噬细胞，将人单核细胞源巨噬细胞FABP4过表达后采用Western-blot（蛋白质免疫印迹）检测JAK2/STAT2两种蛋白的磷酸化水平；

（2）将FABP4过表达后采用Elisa法（酶联免疫吸附测定法）检测人单核细胞源巨噬细胞免疫炎症因子分泌水平；

(3) 将人单核细胞源巨噬细胞FABP4过表达后采用Western-blot检测Src及Src磷酸化水平；

(4) 将人单核细胞源巨噬细胞FABP4过表达后采用酶法检测Src酶活性的水平；