[发明专利]一种乳腺癌临床穿刺样本的解离方法

权利要求书

1.一种乳腺癌临床穿刺样本解离的方法，特征在于，具体包括以下步骤：

(1)样本处理：取乳腺癌穿刺样本组织块进行PBS冲洗，然后将组织块剪碎；

(2)自然沉降弃上清：向步骤(1)剪碎后的组织块中加入PBS，待组织块自然沉降后弃上清得组织块；所述PBS的加入量为1-2ml；所述PBS为预冷的PBS，所述PBS的温度为0-10℃；

(3)离心洗涤：继续向步骤(2)得到的组织块中加入PBS，离心后去上清得组织块；所述离心的条件为：离心的转速为150G-500G，离心的温度为4℃-10℃，离心的时间为2min-5min；

(4)酶解：向步骤(3)离心后的组织块中加入DMEM培养基，然后进行酶解得细胞；所述DMEM培养基包含0.05％-0.2％胶原酶I、0.001％-0.002％DNaseI、0.1％-0.25％胰蛋白酶；所述酶解的温度为36-38℃；所述酶解的时间为0.5-2h；

(5)过筛：向步骤(4)酶解后的单细胞悬液中加入含FBS的DMEM完全培养基，然后过细胞筛、离心，去除上清；

(6)裂红洗涤：向步骤(5)离心后的细胞沉淀中加入红细胞裂解试剂进行红细胞裂解，然后加入含有FBS的PBS，离心后弃上清；

(7)细胞重悬：向步骤(6)离心后的细胞沉淀中加入含有FBS的PBS进行重悬，镜检后再加入含有FBS的PBS将细胞调整至一定的浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述PBS冲洗的次数为0-2次；和/或，所述PBS为预冷的PBS，所述PBS的温度为0-10℃。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述PBS为预冷的PBS，所述PBS的温度为0-10℃。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，所述过筛先过70um细胞筛，再过40um细胞筛；和/或，所述FBS的浓度为0.04％-10％。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中，所述裂解的温度为20℃-25℃；和/或，所述裂解的时间为2-10min；和/或，所述FBS的浓度为0.04％-10％。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(7)中，所述FBS的浓度为0.04％-10％；和/或，所述细胞的浓度为7×10⁵cells/ml-1.2×10⁶cells/ml。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)、(6)中，所述离心的条件为：离心的转速为150G-500G，和/或，离心的温度为4℃-10℃，和/或，离心的时间为2min-5min。