[发明专利]一种调控驱动蛋白活性的方法及应用有效
| 申请号： | 201911283069.9 | 申请日： | 2019-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN111019961B | 公开（公告）日： | 2022-01-11 |
| 发明（设计）人： | 秦兴华;刘国琴;陈子溦;高凤 | 申请（专利权）人： | 西北工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/29;C07K14/415 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 范巍 |
| 地址： | 710072 陕西*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 调控 驱动 蛋白 活性 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种调控驱动蛋白活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）构建驱动蛋白马达区表达载体，然后进行表达和纯化；
2）对构建的驱动蛋白马达区结晶和结构解析；
3）通过对驱动蛋白马达区序列和结构进行比对，获得关键突变位点；
4）构建点突变质粒，然后分别进行野生型和突变体的表达纯化，根据结果，通过突变上述关键位点调控驱动蛋白酶活性；
所述驱动蛋白为棉花驱动蛋白GhKCH2，该棉花驱动蛋白GhKCH2的GenBank accessionnumber: EF432568，且该棉花驱动蛋白GhKCH2的关键突变位点为Thr494。
2.根据权利要求1所述的调控驱动蛋白活性的方法，其特征在于，构建 GhKCH2马达区不同长度截短片段，经原核表达、纯化得到 95%以上纯度的目的蛋白，然后筛选晶体并衍射，获得GhKCH2MD晶体结构。
3.根据权利要求1所述的调控驱动蛋白活性的方法，其特征在于，将关键突变位点Thr494突变为丙氨酸，能够构建抑制驱动蛋白活性的突变体。
4.根据权利要求1所述的调控驱动蛋白活性的方法，其特征在于，将关键突变位点Thr494突变为亮氨酸，能够构建提高驱动蛋白活性的突变体。
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