[发明专利]毛细管电泳分离检测哺乳动物乳中酸性乳寡糖的方法有效
申请号: | 201911283111.7 | 申请日: | 2019-12-13 |
公开(公告)号: | CN112986367B | 公开(公告)日: | 2023-09-12 |
发明(设计)人: | 曹文慧;母智深;李洪亮;乌云;刘红霞;高增丽;刘彦宏 | 申请(专利权)人: | 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 |
主分类号: | G01N27/447 | 分类号: | G01N27/447 |
代理公司: | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人: | 寇海侠 |
地址: | 011500 内蒙古自*** | 国省代码: | 内蒙古;15 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 毛细管 电泳 分离 检测 哺乳动物 乳中 酸性 寡糖 方法 | ||
1.毛细管电泳分离检测哺乳动物乳中3’SL、6’SLN 和6’SL酸性乳寡糖的方法,其特征在于,包括,
预处理以去除哺乳动物乳中的蛋白质和脂肪;然后采用运行缓冲液对所述预处理后的哺乳动物乳进行毛细管电泳分析;
其中,所述运行缓冲液,包括缓冲溶液和添加剂,所述添加剂包括甲醇和/或乙腈;
所述缓冲溶液的浓度为50-100 mM,pH为7.0-7.5;
所述预处理方法为,
对哺乳动物乳进行离心,除去上层脂肪和下层沉淀,吸取中间脱脂乳依次进行超滤处理和纳滤处理,收集截留液,旋转蒸发至干燥后用水溶解
所述超滤处理的截留分子量为5000 -10000Da;
所述纳滤处理的截留分子量为300-500 Da;
所述缓冲溶液为磷酸缓冲溶液或磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液;
所述甲醇和/或乙腈在运行缓冲液中的体积百分比为20-35%;
所述添加剂还包括十二烷基硫酸钠,所述十二烷基硫酸钠在所述缓冲溶液与十二烷基硫酸钠形成的混合液中的浓度为25-50 mM。
2.根据权利要求1所述的毛细管电泳分离检测哺乳动物乳中3’SL、6’SLN 和6’SL酸性乳寡糖的方法,其特征在于,所述预处理方法为:
对哺乳动物乳进行离心,除去上层脂肪和下层沉淀,向中间脱脂乳中加入氯仿和乙醇的混合液,混匀后离心,所得上清液加入无水乙醇,于4℃静置6-12h后离心,所得上清液旋转蒸发至干燥后用水溶解。
3.根据权利要求2所述的毛细管电泳分离检测哺乳动物乳中3’SL、6’SLN 和6’SL酸性乳寡糖的方法,其特征在于,所述氯仿和乙醇的体积比为2:1-1:1;
所述离心的转速为8000-12000r/min,时间为20-40min。
4.根据权利要求1所述的毛细管电泳分离检测哺乳动物乳中3’SL、6’SLN 和6’SL酸性乳寡糖的方法,其特征在于,毛细管电泳分析时,进样方式采用压力进样,进样压力为0.1-0.3 psi,进样时间为3-8s。
5.根据权利要求4所述的毛细管电泳分离检测哺乳动物乳中3’SL、6’SLN 和6’SL酸性乳寡糖的方法,其特征在于,毛细管电泳分析时,毛细管选用未涂层的石英毛细管柱;检测波长为200-220nm;分离电压为15-30kv;毛细管柱温为25℃。
6.根据权利要求1所述的毛细管电泳分离检测哺乳动物乳中3’SL、6’SLN 和6’SL酸性乳寡糖的方法,其特征在于,还包括对所述毛细管进行预处理:
依次用0.05 -0.2 M NaOH溶液冲洗2-10min,0.05-0.2 M HCl冲洗2-10 min,蒸馏水冲洗5-15min,最后用所述运行缓冲液冲洗2-10min。
7.根据权利要求1所述的毛细管电泳分离检测哺乳动物乳中3’SL、6’SLN 和6’SL酸性乳寡糖的方法,其特征在于,还包括,
配制酸性乳寡糖标准品溶液,进行毛细管电泳分析,以标准品的浓度为横坐标,以峰面积的平均值为纵坐标绘制标准曲线,计算标准曲线方程;
将哺乳动物乳中酸性乳寡糖所对应的峰面积代入标准曲线方程中,计算哺乳动物乳中酸性乳寡糖的浓度。
8.根据权利要求1-7任一项所述的毛细管电泳分离检测哺乳动物乳中3’SL、6’SLN 和6’SL酸性乳寡糖的方法,其特征在于,所述哺乳动物乳为牛乳或羊乳。
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