[发明专利]一种测定GnRH并列体二聚体人工抗原偶联率的方法

权利要求书

1.一种测定GnRH并列体二聚体人工抗原偶联率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）对偶联蛋白以及偶联蛋白样品中残留的GnRH并列体二聚体进行定量测定，得到C_偶联蛋白和C_{残留GnRH并列体二聚体}；

（2）对偶联蛋白进行变性还原处理，使得GnRH并列体二聚体发生还原断裂，游离出GnRH并列体单链，对游离态的GnRH并列体单链进行定量测定，得到C_{游离GnRH并列体单链}；

（3）计算偶联率，偶联率的计算公式如下所示：

偶联率=

=

=，

其中n代表物质的量，C代表质量浓度，MW代表摩尔质量。

2.根据权利要求1所述的测定GnRH并列体二聚体人工抗原偶联率的方法，其特征在于，偶联蛋白的定量测定选自以下一种或多种方法：高效液相色谱分析法、紫外分光光度法、考马斯亮蓝结合法、Folin-酚试剂法、双缩脲法、BCA法。

3.根据权利要求1所述的测定GnRH并列体二聚体人工抗原偶联率的方法，其特征在于，偶联蛋白、残留的GnRH并列体二聚体以及游离态的GnRH并列体单链的定量测定采用高效液相色谱法，色谱柱为C4或C8柱，采用流动相梯度洗脱，其中流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为0.05-0.1%（v/v）三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，检测波长为210-280nm。

4.根据权利要求3所述的测定GnRH并列体二聚体人工抗原偶联率的方法，其特征在于，偶联蛋白定量测定采用高效液相色谱法，色谱柱为C4柱，采用流动相梯度洗脱，其中流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A为0.05-0.1%（v/v）三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈，检测波长为210nm。

5.根据权利要求3所述的测定GnRH并列体二聚体人工抗原偶联率的方法，其特征在于，残留的GnRH并列体二聚体以及游离态的GnRH并列体单链的高效液相色谱法定量测定中，检测波长为280nm。

6.根据权利要求1所述的测定GnRH并列体二聚体人工抗原偶联率的方法，其特征在于，对偶联蛋白进行变性还原处理步骤包括：偶联蛋白样品溶液中加入蛋白还原剂和蛋白变性剂，反应温度为20-50℃，反应时间为0.5-2h。

7.根据权利要求6所述的测定GnRH并列体二聚体人工抗原偶联率的方法，其特征在于，蛋白变性剂选自以下一种或两种：尿素、盐酸胍；蛋白还原剂选自以下一种或多种：二硫苏糖醇、β-巯基乙醇、三（2-羧乙基）膦和二硫赤藓糖醇。

8.根据权利要求1所述的测定GnRH并列体二聚体人工抗原偶联率的方法，其特征在于，所述GnRH并列体二聚体为GnRH并列体单体通过分子间二硫键相连而得。

9.根据权利要求1所述的测定GnRH并列体二聚体人工抗原偶联率的方法，其特征在于，所述载体蛋白选自以下一种或多种：牛血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白、甲状腺球蛋白、白喉类毒素和破伤风类毒素。