[发明专利]一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法在审
申请号: | 201911288725.4 | 申请日: | 2019-12-12 |
公开(公告)号: | CN110938623A | 公开(公告)日: | 2020-03-31 |
发明(设计)人: | 周成;马忠友;朱琳;汪建飞;李孝良;李飞跃;肖新;谢越 | 申请(专利权)人: | 安徽科技学院 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人: | 崔自京 |
地址: | 233100 安*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 少量 样品 同时 提取 rna dna 方法 | ||
1.一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法,其特征在于,具体步骤如下:
(1)取样品粉末,加入80℃预热的pH为8.1的平衡酚、抽提缓冲液和β-巯基乙醇,涡旋混匀;每100mg样品粉末加入250μl平衡酚、250μl抽提缓冲液和4%β-巯基乙醇;
(2)向步骤(1)涡旋混匀的溶液中加入蛋白酶K至终浓度为2.0mg/mL,混匀,80℃水浴加热5min;
(3)向步骤(2)加热后的溶液中加入等体积的氯仿/异戊醇,混匀,4℃,12000×g离心15min;
(4)转移上清液,加入等体积的异丙醇,混匀,在-20℃放置30min;
(5)在4℃条件下12000×g离心10min,弃上清,留沉淀;
(6)将沉淀先用70%-75%乙醇洗涤,再用无水乙醇洗涤,室温下放置3min;
(7)加入20-40μl DEPC水溶解,置于-20℃冰箱备用。
2.根据权利要求1所述的一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法,其特征在于,所述抽提缓冲液包括0.1M LiCl,0.1M Tris-HCl,0.01M EDTA,1%SDS。
3.根据权利要求1所述的一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法,其特征在于,步骤(3)所述氯仿、异戊醇的体积比为24:1。
4.根据权利要求1所述的一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法,其特征在于,步骤(6)所述70%-75%乙醇用DEPC水稀释。
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