[发明专利]一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法

说明书

本发明公开了一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法，属于生物技术领域。本发明公开的一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法，利用pH为8.1的平衡酚在少量样本中同时提取RNA和DNA，所需时间较短，操作步骤简单；而且所提取的RNA和DNA纯度较高、完整，能够用于反转录成cDNA等分子生物学操作。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体的说是涉及一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法。

背景技术

分子生物学广泛应用于医学、农业、药学、法医学等各个方面，有着重要的发展意义。从样品中分离出高纯度高质量的核酸是下游实验顺利进行的最基本前提。

DNA和RNA纯化技术主要包括酚氯仿抽提法，离子交换法，盐析法等，但是这些方法往往只能提取出其中一种核酸而浪费另一种核酸。当样品比较有限时，常常需要将同一种样品中的DNA和RNA提取出来；但是提取纯度比较低，难溶解，DNA片段断裂比较严重，只有10Kb左右，很难满足下游的实验要求。且现有同时提取RNA和DNA的方法，需准备试剂种类多，操作步骤多，耗时长，不同批次RNA提取的质量或浓度相差过大，也不能满足下游实验需求。因此，提供一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法，所需时间较短，操作简单，且核酸纯度较高，能够满足下游实验需求。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法，具体步骤如下：

(1)取样品粉末，加入80℃预热的pH为8.1的平衡酚、抽提缓冲液和β-巯基乙醇，涡旋混匀；每100mg样品粉末加入250μl平衡酚、250μl抽提缓冲液和4％β-巯基乙醇；

(2)向步骤(1)涡旋混匀的溶液中加入蛋白酶K至终浓度为2.0mg/mL，混匀，80℃水浴加热5min；

(3)向步骤(2)加热后的溶液中加入等体积的氯仿/异戊醇，混匀，4℃，12000×g离心15min；

(4)转移上清液，加入等体积的异丙醇，混匀，在-20℃放置30min；

(5)在4℃条件下12000×g离心10min，弃上清，留沉淀；

(6)将沉淀先用70％-75％乙醇洗涤，再用无水乙醇洗涤，室温下放置3min；

(7)加入20-40μl DEPC水溶解，置于-20℃冰箱备用。

进一步，所述抽提缓冲液包括0.1M LiCl，0.1M Tris-HCl，0.01M EDTA，1％SDS。

进一步，步骤(3)所述氯仿、异戊醇的体积比为24:1。

进一步，步骤(6)所述70％-75％乙醇用DEPC水稀释。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种从少量样品中同时提取RNA和DNA的方法，利用pH为8.1的平衡酚在少量样本中同时提取RNA和DNA，所需时间较短，操作步骤简单；而且所提取的RNA和DNA纯度较高、完整，能够用于反转录成cDNA等分子生物学操作。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1附图为本发明从棘孢曲霉中提取的RNA和DNA在琼脂糖凝胶上的电泳图。