[发明专利]一种利用细胞质和细胞核分子标记创制香菇栽培菌株核质杂交种的方法

说明书

一种利用细胞质和细胞核分子标记创制香菇栽培菌株核质杂交种的方法，包括下列步骤：步骤1：确定第一种香菇的细胞质类型，使用的rrnL部分基因上游引物为Seq No.1，rrnL部分基因下游引物为Seq No.2；步骤2：确定第二种香菇的细胞核类型，使用的上游引物为Seq No.3，下游引物为Seq No.4；步骤3：以测定的细胞质和细胞核序列作为分子标记，采用原生质体制备单倍体、单单杂交和回交等技术创制栽培菌株的核质杂交种。本发明为香菇新品种的培育提供有益帮助。

技术领域

本发明属于食用菌分子鉴定技术领域，具体涉及一种鉴定香菇菌株细胞核类型的方法、一种鉴定香菇菌株细胞质类型的方法和一种创制香菇栽培菌株核质杂交种的方法。

背景技术

菌种是香菇生产三大要素(菌种、培养料和栽培管理)中最重要的基础生产资料，是影响香菇产量及质量构成的关键因子。我国拥有丰富的野生种质资源，引以为傲的砍花法阶段所用的菌种也是各地的野生菌种，但在引进纯菌种技术和日本菌种之后，日本菌种一直作为我国香菇新菌种培育亲本的主要来源，甚至我国栽培菌种与广布野生种已属于不同的类群。 2003年，日本专门修改《种苗法》，对中国香菇凡带有日本原菌种DNA特征的，赋予海关查验后按侵犯知识产权处理。假如现在我国栽培菌种都属于日本菌种的后裔，那将来在全球香菇贸易中，我国香菇产业受到的影响很难想象。当务之急是首先明晰中国香菇栽培菌种的来源，如果与假设一样，就需寻找一个新的突破口对我国的香菇种质资源进行改良和创新。

香菇同日本的Shiitake一样都是俗称，它的学名为Lentinula edodes(Berk.)Pegler，主要分布在东亚。但随着交配反应和分子数据的引入，L.edodes的分类情况越来越复杂，其中最受大家认可的是Hibbett基于ITS(Internal transcribed spacer)数据得出的结论：香菇是个复合种，学名为L.edodes sensu lato。它包括四个形态种：分布于东亚的狭义香菇L.edodes sensu stricto，分布于东南亚的砖红香菇L.lateritia，分布于新西兰的新西兰香菇L.novaezelandiae 和分布在东亚西南部高海拔地区的一个未被描述的形态种。其中，狭义香菇和砖红香菇各包括两个分支，狭义香菇的一个分支分布在东亚的北部，一个分支分布在东亚的南部。从地理分布来看，中国香菇具有狭义香菇的两个分支和未被描述的形态种，日本仅有分布在东亚北部的狭义香菇一个分支。

为了方便，狭义香菇标为A类群(东亚北部的分支为A1，东亚南部的分支为A2)，未被描述的形态种标为B类群。我们团队在前期工作中利用ITS1/5.8S/ITS2多态性和线粒体基因组分别对中国香菇野生和栽培种细胞核和细胞质进行了分型，结果发现中国栽培和野生香菇菌种的细胞核和细胞质中均存在A1型，在野生种中还存在A2和B型。追溯我国砍花法时期的栽培区域，这个区域多属于A2型分布区域，少为B型分布区域，而现在所用的细胞核和细胞质都为A1型的栽培菌种与我国东北部、日本的野生种分布区域一致。考虑到我国栽培菌种的亲本来源，很难排除我国现在栽培菌种都是日本菌种的后裔。甚至许多由细胞核A2 或B型分布区的野生种与日本优良菌株杂交而来的栽培种中也没有细胞核A2和B型遗传物质的影子。看来担心的结果还是呈现了，我国现有栽培菌种的细胞核均为日本菌种的后裔，广布野生型细胞核并没有转移到栽培种中。