[发明专利]一种检测人类乳腺癌易感基因分型的试剂盒及其使用方法与应用

权利要求书

1.一种检测人类乳腺癌易感基因分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括引物组，所述引物组包括分别针对人类乳腺癌易感基因的6个检测位点rs2241766、rs2273535、rs4680、rs4880、rs28897756和rs55770810设计的引物，针对每个检测位点的引物包含对应的第一上游引物、第二上游引物和下游引物；所述引物组分别包括如下引物：

针对rs2241766位点的引物包括核苷酸序列为SEQ ID No.1的第一上游引物，核苷酸序列为SEQ ID No.2的第二上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.3的下游引物；

针对rs2273535位点的引物包括核苷酸序列为SEQ ID No.4的第一上游引物，核苷酸序列为SEQ ID No.5的第二上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.6的下游引物；

针对rs4680位点的引物包括核苷酸序列为SEQ ID No.7的第一上游引物，核苷酸序列为SEQ ID No.8的第二上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.9的下游引物；

针对rs4880位点的引物包括核苷酸序列为SEQ ID No.10的第一上游引物，核苷酸序列为SEQ ID No.11的第二上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.12的下游引物；

针对rs28897756位点的引物包括核苷酸序列为SEQ ID No.13的第一上游引物，核苷酸序列为SEQ ID No.14的第二上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.15的下游引物；

针对rs55770810位点的引物包括核苷酸序列为SEQ ID No.16的第一上游引物，核苷酸序列为SEQ ID No.17的第二上游引物和核苷酸序列为SEQ ID No.18的下游引物。

2.一种非疾病治疗和诊断目的检测人类乳腺癌易感基因分型的方法，其特征在于，使用如权利要求1所述的试剂盒通过KASP技术进行基因分型；

包括以下步骤：利用试剂盒中的引物组结合KASP技术针对人类乳腺癌易感基因的6个检测位点rs2241766、rs2273535、rs4680、rs4880、rs28897756和rs55770810进行基因分型检测。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、使用所述引物组配制引物组工作液；

S2、建立对应检测位点的PCR反应体系，所述反应体系包括人源基因组DNA、KASP 预混液和步骤S1中所述的引物组工作液；

S3、设置空白对照；

S4、进行PCR扩增反应；

S5、扫描荧光数据，得到乳腺癌易感基因的分型结果。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中引物组工作液的配制方法为引物浓度均为100 µM的溶液，按照第一上游引物 12µl、第二上游引物 12µl、下游引物30 µl 和Tris-HCl 46 µl 配制成100 µl的引物组工作液。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中PCR反应体系包括人源基因组DNA 2.5 µl，浓度范围为5~100 ng/µl；KASP Master Mix 2.5 µl；引物组工作液0.07 µl。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中人源基因组DNA的样本提取方法包括口腔拭子提取或全血提取的至少一种。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中空白对照为使用等体积的去离子水代替人源基因组DNA加入到所述步骤S2的PCR反应体系中。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S4中PCR扩增程序如下：

预变性：30℃，1分钟；94℃，15分钟；

变性：94℃，20秒变性；65~59℃梯度退火1分钟；共10个循环，退火温度每个循环降0.6℃；

扩增：94℃，20秒变性；57℃退火1分钟，共30个循环；

荧光扫描：30℃，1分钟。