[发明专利]用于同步检测华法林代谢基因多态性的方法

说明书

本发明提供一种同步检测华法林代谢基因多态性的引物组及检测方法，有益于检测通量的提高。本发明先提供用于同步检测华法林代谢基因多态性的引物组，第一组引物对的上游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.2所示；第二组引物对的上游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.4所示；第三组引物对的上游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.6所示。本发明通过一次反应可以对华法林代谢基因多态性进行检测。不仅提高了检测效率，也很大程度的节约了成本费用。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其是涉及用于同步检测华法林代谢基因多态性的引物组及检测方法。

背景技术

华法林是目前临床上广泛使用的维生素K拮抗剂类口服抗凝血药，用于静脉血栓栓塞、心肌梗死、缺血性脑卒中、心脏瓣膜置换术后、房颤等的抗凝治疗和预防。目前临床使用的华法林制剂是S-华法林和R-华法林的消旋体混合物，其中S-华法林的抗凝活性是R-华法林的2.7～3.8倍，在体内主要由肝脏细胞色素P450 2C9(CYP2C9)进行代谢。CYP2C9基因编码区存在着单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism，SNPs)，其中比较重要的是CYP2C9*2和CYP2C9*3，国外CYP2C9基因研究主要集中在CYP2C9*2和CYP2C9*3，研究表明，具有这两种基因型的个体所需华法林剂量明显降低，出血的风险也随之增加。另外，维生素K环氧化物环氧化酶复合体1(VKORC1)是体内维生素K依赖性凝血因子生成的限速酶，华法林可竞争性抑制次酶的作用而达到抗凝效果。

维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1基因(vitamin K epoxide reductasecomplex subunit 1，VKORC1)基因的变异会导致VKORC1酶的活性降低，进而导致维生素K依赖性凝血因子的功能降低。VKORC1基因1639G＞A位点多态性可解释使用华法林维持剂量的差异。

PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应)已被广泛应用于医学、遗传学、微生物学乃至整个生命科学中。目前，可针对CYP2C9基因的CYP2C9*2(c.430C＞T，rs1799853)、CYP2C9*3(c.1075A＞C，rs1057910)和VKORC1基因的c.1639G＞A(rs9923231)位点分别设计PCR检测试验，以进行基因多态性的检测。由于每个PCR反应只针对一个位点，故检测通量较低。多重PCR是在常规PCR基础上发展的一种新型扩增技术，即可在一个反应体系中加入两对及两对以上的引物，同时扩增多个核酸片段。多重PCR在微生物、遗传病、肿瘤药物基因组学有着重要的应用。

发明内容

为了解决上述缺陷，本发明的技术目的是提供一种同步检测华法林代谢基因多态性的引物组及检测方法，有益于检测通量的提高。

为了达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

首先提供一种用于同步检测华法林代谢基因多态性的引物组，包含下述3对引物对中的至少两对：第一组引物对的上游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.2所示；第二组引物对的上游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.4所示；第三组引物对的上游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.6所示。