[发明专利]一种加压素的二硫类似物及其制备方法

说明书

本发明公开了一种加压素的二硫类似物及其制备方法，通过对多肽药物加压素进行二硫键的替换得到一种还原条件下稳定的加压素二硫类似物，目标多肽的合成是通过Fmoc固相合成方法实现，粗品经纯化，冻干得到加压素的二硫类似物。还原稳定性实验表明本发明加压素的二硫类似物具有良好的还原稳定性。

技术领域

本发明涉及一种加压素的二硫类似物及其制备方法，属于有机合成领域。

背景技术

抗利尿激素，是一种由下丘脑分泌，储存在脑下垂体，然后释放到血液，帮助人体保持适宜水量的激素。抗利尿激素分泌不足会引起尿崩症，如果得不到及时的治疗，容易引起头痛头晕、记忆力衰退的症状，严重的患者会出现水中毒，出现视力下降、昏迷甚至是死亡，危害极大。

加压素，又称抗利尿激素，目前作为一种二硫键环肽药物，半衰期在16到24分钟之间。二硫键在约束肽的构象上起着至关重要的作用，然而，二硫键在体内容易被硫醇和二硫异构酶还原，导致肽结构重排和生物活性的丧失。因此，寻找一种稳定的共价键替换易断裂的二硫键对于提高二硫键环肽的代谢稳定性和保持其生物活性具有重要的意义。

发明内容

针对加压素的二硫键在体内容易被硫醇和二硫异构酶还原的缺陷，本发明旨在提供一种还原条件下稳定的加压素二硫类似物及其制备方法。本发明利用Fmoc-A₂(Ally/Alloy)-OH把加压素第6位半胱氨酸的S用CH₂替代，形成一种还原环境下稳定的加压素二硫类似物。实验表明本发明加压素的二硫类似物在二硫苏糖醇DTT作为还原剂的条件下具有良好的稳定性。

本发明加压素的二硫类似物，是通过使用二氨基二酸硫醚键替换普兰林肽二硫键后获得的。

所述二氨基二酸为Fmoc-A₂(Ally/Alloy)-OH，其结构式如下：

本发明加压素的二硫类似物，其结构如下：

本发明加压素的二硫类似物的具体制备过程包括如下步骤：

步骤1：合成加压素二硫类似物线性树脂肽

将Rink Amide-AM树脂转移到固相合成管中，DMF溶胀后采用Fmoc法依次进行氨基酸的缩合连接。

步骤2：加压素线性树脂肽Alloc和Ally保护基的脱除

配制Pd(PPh₃)₄和N-甲基苯胺的THF混合液(1倍当量Pd(PPh₃)₄:28倍当量的N-甲基苯胺：200uL THF)，加入步骤1所得树脂中避光常温反应2小时；所得树脂依次用DMF、DM F配制的0.5％NaS₂CN(C₂H₅)₂溶液、DCM、DMF洗涤；

步骤3：加压素二硫类似物线性树脂肽分子内环化

外加20％哌啶的DMF溶液浸泡树脂，DMF洗涤树脂；配制PyAOP、HOAT和NMM的DMF混合液(5倍当量PyAOP：5倍当量HOAT：10倍当量NMM:150uLDMF)，加入步骤2所得树脂中反应4小时，反应结束后所得树脂用大量DMF洗涤；

步骤4：加压素二硫类似物粗品的合成

将步骤4中所得的树脂洗涤干燥后，加入切割试剂反应，随后收集切割液，加入冰乙醚沉淀，干燥得到加压素二硫类似物粗肽；

步骤5：加压素二硫类似物粗品的纯化

加压素二硫类似物粗肽溶解过滤后，滤液经反相C18柱进行分离纯化，收集所需要的流出液，样品峰合并后经冷冻干燥，获得加压素二硫类似物精肽。