[发明专利]一种快速检测马铃薯黑胫病的RPA引物、试剂盒、方法及系统

权利要求书

1.一种快速检测马铃薯黑胫病的RPA引物，其特征在于，其由SEQ ID NO.1-2所示的核苷酸序列组成：

SEQ ID NO.1 ACTACCTGAACCGTAACAAGACGCCAATCCACCC；

SEQ ID NO.2 CACTTTCACAGACACCACAGCAATCAGCCCTTCG。

2.一种快速检测马铃薯黑胫病试剂盒，其特征在于，其具有如权利要求1所述的RPA引物和具有重组酶聚合酶的反应液。

3.一种快速检测马铃薯黑胫病的方法，其特征在于：其利用权利要求1所述的RPA引物或权利要求2所述的试剂盒实现，包括以下步骤：

选取、培养并提取待测马铃薯病原菌DNA；

利用权利要求1所述的RPA引物对待测马铃薯病菌DNA待测进行恒温扩增，得到待测马铃薯病菌DNA的恒温扩增片段；

对待测马铃薯病菌DNA的恒温扩增片段进行琼脂糖凝胶电泳检测，得到琼脂糖凝胶电泳结果；

当琼脂糖凝胶电泳结果为阳性，则判定待测马铃薯病菌为马铃薯黑胫病，反之则判定待测马铃薯病菌不是马铃薯黑胫病。

4.如权利要求3所述的快速检测马铃薯黑胫病的方法，其特征在于，所述利用权利要求1所述的RPA引物对待测马铃薯病菌DNA待测进行恒温扩增的反应体系为：总体积50μL，其中含模板DNA 2μL，Rehydration Buffer 29.5μL、引物F和R各 2.4μL、ddH2O 11.2μL、最后再加入280 mmol/L的醋酸镁溶液2.5μL，将配好的50μL体系加入的冻干的重组酶聚合酶中。

5.如权利要求3所述的快速检测马铃薯黑胫病的方法，其特征在于，所述利用权利要求1所述的RPA引物对待测马铃薯病菌DNA待测进行恒温扩增的反应的条件为39℃恒温扩增20min，冰上终止反应。

6.如权利要求3所述的快速检测马铃薯黑胫病的方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶电泳结果为阳性的判定标准为出现特异性条带；

其中，所述特异性条带的大小为302bp。

7.一种快速检测早期马铃薯黑胫病的装置，其特征在于，包括:

马铃薯病原菌DNA提取单元；

利用权利要求1所述的RPA引物对马铃薯病原菌DNA提取单元输出的马铃薯病原菌DNA进行恒温扩增的反应单元；

对反应单元输出的恒温扩增结果进行分析的检测单元；

对检测单元输出的检测结果进行判定的结果单元。

8.如权利要求7所述的快速检测早期马铃薯黑胫病的装置，其特征在于，所述马铃薯病原菌DNA提取单元包括：

具有对马铃薯组织进行消毒的消毒模块；

对组织进行病原菌分离的分离模块；

对分离的病原菌中具有喷菌现象的病组织浸出液进行蘸取的蘸取模块；

对蘸取的浸出液进行病原菌基因组DNA提取，获得待测马铃薯病原菌DNA的提取模块。