[发明专利]一种玻璃毛细管表面抗体固定方法

权利要求书

1.一种玻璃毛细管表面抗体固定方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1：修饰，将玻璃毛细管表面进行修饰处理；

S2：包被抗体，将稀释后的包被抗体溶液固定到经修饰处理后的玻璃毛细管上；

S3：封闭，将S2中已包被抗体玻璃毛细管进行封闭处理；

S1中，所述修饰处理为玻璃毛细管的氨基化处理，具体过程如下：

a.让玻璃毛细管在110℃的H2O中使玻璃毛细管表面羟基化；

具体步骤为：向离心管中加入灭菌水确保水浸没玻璃毛细管，超声或上下震动排除管内气泡，确保玻璃毛细管中无气泡；然后将离心管放入烘箱中100℃空气浴4h；

处理完成后，排掉玻璃毛细管内水分，然后将离心管放入烘箱中100℃干燥固定1h；如短时间内不能进行氨化处理，需将玻璃毛细管放入4℃冰箱干燥保存，以备后续处理；

b. 将枝形聚合物 PAMAM通过硅烷化试剂 3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）的端氨基与甲基丙烯酸甲酯（MMA）的双键发生Micheal加成反应，逐步键合到玻璃毛细管内壁上得到半代的 PAMAM；然后端酯基与乙二胺（EDA）发生酰胺化反应，得到整代的枝形大分子聚酰胺-胺（PAMAM），得到氨基化的玻璃毛细管表面；具体步骤如下：

a半级氨化：玻璃毛细管经羟基化处理后，加入10%APTES，放入烘箱中70℃反应4h；然后排掉管内试剂，用无水乙醇洗3次，每次浸泡2min，吹干；

b Michael加成：向上述玻璃毛细管中加入10%MMA，放入烘箱中40℃反应24h，然后排掉管内试剂，用无水乙醇洗3次，每次浸泡2min，吹干；

c 一级氨化：向上述玻璃毛细管中加入20%EDA，放入烘箱中40℃反应24h，然后排掉管内试剂，用无水乙醇洗3次，每次浸泡2min，吹干或烘箱中25℃过夜烘干；然后将处理好的玻璃毛细管做好标记并放入4℃冰箱干燥保存备用；在S2中，所述包被抗体溶液由磷酸盐缓冲液或者碳酸盐缓冲液进行稀释；并将玻璃毛细管在37℃条件下，包被1-5H；

在S3中，所述已包被抗体玻璃毛细管主要成分是氨基化处理的玻璃毛细管，玻璃毛细管的材质为高硼硅玻璃 ID=0.7mm±0.005mm ； OD=1.2mm±0.02mm ；L=30mm±0.5mm；

在S3中，所述已包被抗体玻璃毛细管是通过包被抗体溶液与玻璃毛细管按照包被量为10～30μg/mL，于37℃温育条件下，在pH为6.5～7.5的20～100mmol/L磷酸盐缓冲液中交联反应1～5h得到。

2.根据权利要求1所述的一种玻璃毛细管表面抗体固定方法，其特征在于：所述封闭处理时间为1-3H，封闭处理时使用的封闭液为：脱脂奶粉、酪蛋白钠盐或者牛血清白蛋白溶液。

3.根据权利要求2所述的一种玻璃毛细管表面抗体固定方法，其特征在于：所述封闭液为：2%酪蛋白钠盐溶液，所述酪蛋白钠盐溶液加入玻璃毛细管后于37℃条件下反应1～3H。