[发明专利]一种玻璃毛细管表面抗体固定方法

说明书

本发明公开了一种玻璃毛细管表面抗体固定方法，其特征在于：包括如下步骤：S1：修饰，将玻璃毛细管表面进行修饰处理；S2：包被抗体，将稀释后的包被抗体溶液固定到经修饰处理后的玻璃毛细管上；S3：封闭，将S2中已包被抗体玻璃毛细管进行封闭处理；本发明对固相玻璃毛细管进行氨基化修饰处理，将树枝状大分子的独特结构引入到毛细管内壁修饰中，可以使玻璃毛细管表面凹凸不平，大大增加毛细管的表面积和容量，让其具有吸附蛋白质的能力，为玻璃毛细管表面抗体包被提供了一种新思路。

技术领域

本发明涉及一种玻璃毛细管表面抗体固定方法，属于表面化学及蛋白固定技术领域。

背景技术

在免疫学检验中，经常采用将抗体固定到固相载体上来检测样品中的目标物，目前常用的固定方法主要包括物理吸附法和化学共价法，其他抗体固定方式如聚合物包埋法等。

物理吸附法：指通过离子键、静电作用、疏水力和极性相互作用等非共价形式固定到固相表面，是最简单的抗体固定方法。优点是操作简单、反应简单、快速且不需要添加偶联试剂或对目标抗体进行修饰；但缺陷也比较明显，固相与抗体间的作用力受离子强度、PH、温度等影响较大，重现性较差，抗体容易失活、变性等。

化学共价法：指利用蛋白质表面的氨基通过化学反应，将蛋白分子共价固定到固相表面。目前最为广泛应用于羧基和氨基的偶联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺（EDC）和1-环已基-2吗啉乙基碳二亚胺（CMC）。它们可直接将抗体固定到羧基或氨基的固相表面；也可以先与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）联合使用，将固相的羧基活化成NHS活化酯，然后与抗体的氨基形成酰胺键，该反应是蛋白内部氨基酸之间的缩合反应。

目前物理吸附所常用固定抗体的固相材料包括塑料（聚苯乙烯和硅树脂）、膜（硝酸纤维素膜和尼龙膜）和金属表面。其中聚苯乙烯是最广泛应用的酶联免疫吸附测定的固相载体。如酶联免疫吸附法（ELISA）检测，直接用PH9.6的碳酸盐缓冲液稀释抗体，然后加到酶标板上实现抗体固定化，研究发现用从灰树花中提取的疏水蛋白对固相聚苯乙烯进行修饰可以提高固相载体的亲水性。Raghav研究表明直接在L-天冬酰胺包覆的柠檬酸盐包覆金纳米颗粒（cit-AuNPs）上进行物理吸附效果明显优于直接在cit-AuNPs上进行物理吸附和用EDC/NHS活化cit-AuNPs。玻璃材质本身对抗体没有吸附能力，通过对没有蛋白吸附能力的的玻璃毛细管进行改性修饰，使其结构发生变化，据张志胜“以枝形大分子聚酰胺胺(PAMAM)为键合固定相的开管毛细管电色谱柱的制备及评价”成功的将枝形大分子结构引入玻璃毛细管内部修饰，并带有大量活性基团。

申请号为：CN200910027564.3，公开号为：CN101671395的发明专利公开了一种氨基表面快速固定蛋白或含氨基分子的方法，将玻璃、硅片、金等固相表面氨基化，用EDC/NHS混合液使多羧基化合物（至少含两个羧基的化合物，如乙二酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、柠檬酸、酒石酸、乙二胺四乙酸等）的羧基功能化，将功能化的多羧基化合物与氨基化的固相表面反应使功能化的的多羧基化合物结合到氨基化固相表面，而剩余的功能化羧基可迅速的与带固定蛋白分子或其他含氨基的分子反应，使蛋白固定到固相表面。该化学共价偶联方法步骤较多，耗时耗力，且需要交联剂、多羧基化合物等辅助试剂，需要使用浓硫酸/过氧化氢混合溶液等危险试剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种玻璃毛细管表面抗体固定方法，该固定方法在固相玻璃毛细管基础上进行优化，以一种更有效、更简单、更安全的方式来达到玻璃毛细管表面抗体固定的目的。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

本发明的基本构思如下：

研究发现将不能吸附抗体的玻璃毛细管通过氨基化修饰处理可以改变玻璃毛细管表面，可以直接物理吸附待固定抗体，通过该方式固定抗体也能达到所需的实验要求。

本发明的主要目的是：如何更安全简单的对玻璃毛细管进行氨化处理，并在此基础上进行物理吸附包被抗体，以此达到实验需要。