[发明专利]一种外泌体及其制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种外泌体的制备方法，涉及生物技术领域，包括以下步骤：将人星型胶质细胞置于培养基中培养；利用超声装置对人星型胶质细胞进行循环刺激；将经超声循环刺激后的人星型胶质细胞继续培养后收集细胞培养上清，对细胞培养上清离心处理得到外泌体。还提供上述制备方法获得的外泌体及应用。上述制备方法操作简单、成本较低且可控性强。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种无创超声处理细胞在制备外泌体中的应用、外泌体及其制备方法和应用。

背景技术

阿尔茨海默症(Alzheimer’disease，AD)，又叫老年痴呆症，是一种中枢神经系统变性病，起病隐袭，病程呈慢性进行性，该疾病也是最常见的引起痴呆的原因，约占痴呆总数的60-80％。其主要病理特征包括β淀粉样蛋白(β-amyloid，Aβ)组成的老年斑和过度磷酸化的微管结合蛋白tau组成的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFT)。到目前为止，目前针对阿尔茨海默症的治疗药物仅仅只能在病情发展的特定阶段缓解部分症状，并不能减缓、治愈阿尔茨海默症。因此，发展针对阿尔茨海默症病因的治疗手段，是急需解决的重要问题。

外泌体(exosomes)是由脂质双分子层包裹形成的类圆形膜性小体，是胞外囊泡的一种类型，内含多种蛋白质、RNA、miRNA、生长因子及其受体等。外泌体可以在中枢神经系统和外围循环之间进行传播1。多种神经退行性疾病都有蛋白的异常积累和聚集2，神经元核内体和溶酶体中富余物质的积累，是阿尔茨海默病中导致神经脆弱的重要因素。细胞外囊泡(EVs)(外泌体和微泡)形成内源性转运系统参与生物分子(蛋白质和RNA)在细胞之间交换。这使得EVs具有巨大的药物输送和再生医学应用的潜力。

目前制备外泌体的方法过程复杂，可控性差且成本较高。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种操作简单、成本较低且可控性强的外泌体及其制备方法及应用。为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：

一种外泌体的制备方法，包括以下步骤：

将人星型胶质细胞置于培养基中培养；

利用超声装置对人星型胶质细胞进行循环刺激；

将经超声循环刺激后的人星型胶质细胞继续培养后收集细胞培养上清,对细胞培养上清离心处理得到外泌体。

在其中一个实施例中，所述循环刺激条件为:超声装置的探头频率为0.5-5MHz，幅值为000-50mV，脉冲重复频率为50-1000Hz，工作周期为10％-70％，超声装置的功率放大器放大5％-45％，循环20-200k次，脉冲间隔为2μs-2s，超声时间为1分钟-10分钟。

在其中一个实施例中，所述培养基为不含外泌体的高糖DMEM。

在其中一个实施例中，将经超声循环刺激后的人星型胶质细胞继续培养24-72小时后收集细胞培养上清。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是提供上述制备方法获得的外泌体。

在其中一个实施例中，所述外泌体的平均直径约为50nm～150nm。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是将上述制备方法制备得到的外泌体在制备预防和/或治疗阿尔茨海默病药物中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是将上述制备方法制备得到的外泌体在用于降解β-淀粉样蛋白中的应用。