[发明专利]一种检测非洲猪瘟CD2v蛋白抗体的ELISA方法、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种检测非洲猪瘟CD2v蛋白抗体的ELISA方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将重组的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白包被于微孔板中，然后封闭，再于不同的微孔中加入待测样本及标准阳性对照、阴性对照进行反应，洗板；

(2)接着加入HRP标记的CD2v抗原反应，洗板；再加入显色液进行显色反应，加入终止液终止反应；

(3)在450nm波长下，测定各孔吸光度值；根据测定结果，对待测样本进行定性或定量的判断。

2.根据权利要求1所述的检测非洲猪瘟CD2v蛋白抗体的ELISA方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的包被量为0.06μg/孔；

步骤(2)中所述的HRP标记的CD2v抗原的加入量为0.02μg/孔。

3.根据权利要求1所述的检测非洲猪瘟CD2v蛋白抗体的ELISA方法，其特征在于：所述的定性判断的标准如下：待检血清样本OD450>0.4，判为阳性，反之为阴性。

4.一种用于检测非洲猪瘟病毒CD2v抗体的双抗原夹心ELISA试剂盒，其特征在于：包括CD2v蛋白包被的酶标板和辣根过氧化物酶标记的CD2v抗原。

5.根据权利要求4所述的双抗原夹心ELISA试剂盒，其特征在于：还包括底物显色液、终止液、阳性对照、阴性对照、血清稀释液和10倍浓缩洗涤液中的至少一种。

6.根据权利要求4或5所述的双抗原夹心ELISA试剂盒，其特征在于：所述的CD2v蛋白包被的酶标板通过如下步骤制备得到：用pH9.6、0.05M的碳酸盐缓冲液作为包被缓冲液，将浓度为0.6μg/L的CD2v蛋白溶液按100μL/孔加入空白酶标板中，4℃包被过夜；接着弃去包被液，按200μL/孔加入浓度为5％(w/v)的BSA溶液，4℃静置12小时，洗涤甩干，室温干燥后装入包装袋，加入干燥剂，真空保存。

7.根据权利要求5所述的双抗原夹心ELISA试剂盒，其特征在于，所述的底物显色液的组成如下：浓度为2mg/mL的四甲基联苯乙醇溶液0.5mL，底物缓冲液10mL，0.75％H₂O₂，32μL；

其中，底物缓冲液的组成如下：浓度为0.2mol/L的Na₂HPO₄溶液25.7mL，浓度为0.1M的柠檬酸24.3mL，蒸馏水50mL。

8.根据权利要求5所述的双抗原夹心ELISA试剂盒，其特征在于：

所述的阳性对照为CD2v抗体和含CD2v抗体的样品中的至少一种；

所述的阴性对照为不含CD2v抗体的样品。

9.权利要求1～8任一所述的双抗原夹心ELISA试剂盒在检测非洲猪瘟病毒CD2v蛋白抗体中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的双抗原夹心ELISA试剂盒用于鉴别CD2v缺失株免疫猪群中的猪是否存在非洲猪瘟病毒感染或用于未免疫猪群的非洲猪瘟病毒的抗体检测。