[发明专利]一种胎盘胎儿源性间充质干细胞的分离培养方法

权利要求书

1.一种胎盘胎儿源性间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：采集胎盘胎儿源性绒毛膜板组织，具体为：在脐带和胎盘交接处外1cm处的胎盘上部获取胎盘胎儿源性绒毛膜板组织；

S2：采用组织块不完全消化法对胎盘胎儿源性绒毛膜板组织进行分离和培养，得到胎盘胎儿源性间充质干细胞；

S3：胎盘胎儿源性间充质干细胞的传代，其中：从第二代起，细胞融合度达到80％～90％时进行传代培养，传代培养至第五代。

2.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，步骤S2具体为：

S2-1：将胎盘胎儿源性绒毛膜板组织进行清洗和剪碎，得到碎组织块；

S2-2：向碎组织块内加入消化液，消化液与碎组织块的质量比为2：1；

S2-3：消化完成后缓冲液清洗，清洗完成后离心；

S2-4：在无血清培养基中接种培养，从第四天起每隔两天观察细胞生长情况，当细胞融合度达70％～80％时，即可进行传代。

3.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，步骤S3具体为：

S3-1：从第二代起，当细胞融合度达80％～90％时进行传代培养，先轻轻摇晃培养瓶，然后倾倒掉原有培养基；

S3-2：向其中加入PBS缓冲液进行清洗，清洗完成后加入干细胞温和消化酶，当细胞变亮变圆后，加入缓冲液进行稀释，缓冲液的体积为干细胞温和消化酶体积的5倍；

S3-3：将消化得到的细胞进行离心且进行传代培养，培养至第五代。

4.根据权利要求3所述的分离培养方法，其特征在于，还包括步骤S4：胎盘胎儿源性间充质干细胞的冻存，具体为：用无血清细胞冻存液进行重悬，调整细胞密度为(1～3)×10⁶个/ml，分装于细胞冻存管中，直接置于-80℃无菌环境中过夜保存，次日投入液氮中保存。

5.根据权利要求2所述的分离培养方法，其特征在于，步骤S2-2具体为：将碎组织块转移至离心管中，按每克组织块加入2ml消化液，然后置于37℃水浴中，每隔5min轻晃离心管。

6.根据权利要求5所述的分离培养方法，其特征在于，所述消化液为质量分数为0.5％的胶原酶液。

7.根据权利要求2所述的分离培养方法，其特征在于，步骤S2-4具体为：用无血清培养基重悬沉淀组织，然后按每T75培养瓶0.2～0.3g组织接种培养，将培养基补充至10ml；轻轻摇晃培养瓶，将组织块与培养基混匀；将培养瓶置于37℃，体积分数为5％CO2培养箱内进行培养；从第四天起，每隔两天观察细胞生长情况，当细胞融合度达70％～80％时，即可进行传代。