[发明专利]一种生产霉酚酸的发酵培养基及发酵方法

说明书

一种生产霉酚酸的发酵培养基，所述发酵培养基包含甲硫氨酸、碳源和氮源，所述氮源不包含复合有机氮源。本发明所述的发酵培养基及发酵方法明显提高了利用短密青霉菌生产霉酚酸的效价，尤其是甲硫氨酸浓度为1.5g/L时，可使发酵效价提高到9214μg/mL，补料工艺的开发可使发酵效价达13506ug/ml。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种生产霉酚酸的发酵培养基及发酵方法。

背景技术

霉酚酸（Mycophenolic acid，MPA，又名麦考酚酸）是一种具有抗真菌、抗肿瘤及免疫抑制作用的抗生素，其对次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶具有可逆性抑制作用，并对淋巴细胞活性起选择性抑制作用；霉酚酸的酯化衍生物--吗替麦考酚酯（Mycophenolate mofetil,MMF）作为新一代免疫抑制剂被广泛应用于器官移植和自身免疫性疾病的临床治疗中；MPA做为合成MMF的前体化合物，提高MPA的工业化水平对于生产企业来说十分重要。

霉酚酸的发酵技术和其他抗生素工业化生产方式相同，由传统的固态培养基发酵转变为液态深层发酵方式，美国专利US4452891提到，短密青霉在27℃振荡条件下培养6天，霉酚酸的产量为2.4g/L，而在27℃非振荡条件下培养14天能达到3.6g/L；Hachiro进行菌种诱变后，液体发酵水平提高到5.8g/L；高兴蓉等对发酵条件和可利用碳源进行了研究，经优化后摇瓶产量为8.565g/L，但均没有实现工业化生产；中国专利申请CN200810151218.1公开了一种麦考酚酸固态发酵的方法，公开了如下工艺步骤：(1)将经传代培养的青霉菌接入到种子培养基上进行培养，再接入到二级种子培养基上进行培养，得到二级种子液；(2)向一容器中，按质量份数加入非惰性载体1～1.8份，惰性载体1～2份，混合均匀，加入蒸馏水，使容器内相对湿度为65％～95％，火菌0.5～1.5h，冷却全22～28℃，接入0.2～2质量份的所述二级种子液，在24～26℃，相对湿度为70％～95％下培养90～360小时；该固态发酵方法不适用于规模化的工业生产。

中国专利申请CN102321697B公开了后期补加利用短密青霉高效累积生产霉酚酸的方法，公开了发酵培养基包含如下浓度的组分：葡萄糖(C6H12O6·H2O)80～120g/L、甘氨酸12～15g/L、磷酸二氢钾2～4g/L、硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5～1g/L、甲硫氨酸0.5～1g/L，溶剂为蒸馏水，pH值为4.4～4.8，最终效价达5.0g/L。

中国专利申请CN102127572B公开了一种利用短密青霉高效累积生产霉酚酸的方法，公开了发酵培养基包含如下浓度的组分：葡萄糖(C6H12O6·H2O) 80～120g/L、甘氨酸12～15g/L、磷酸二氢钾2～4g/L、MgSO4·7H2O 0.5～1g/L、甲硫氨酸0.5～1g/L，溶剂为蒸馏水，pH值为4.4～4.8；发酵培养分为发酵前期和发酵后期两个阶段，发酵前期为120小时，期间自然发酵不补加任何的培养基，发酵后期向发酵罐中补加甲硫氨酸补料培养基，该甲硫氨酸补料培养基中甲硫氨酸浓度为12.5g/L，补加的速率为0.5～2.0g/L·天，补加时间为24小时，最终效价达5.0g/L。

中国专利申请CN101671706B公开了一种麦考酚酸发酵过程的补糖方法，公开了发酵培养基包含如下组分：葡萄糖(C6H12O6·H2O)100g/L，甘氨酸14g/L，KH2PO4 3g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，L-蛋氨酸0.5g/L，微量元素溶液(FeSO4·7H2O 0.22％，CuSO4·5H2O0.03％，ZnSO4·7H2O 0.246％，MnSO4·H2O 0.016％，KMnO4 0.02％)1mL；pH 4.5，最终效价达10.26g/L。