[发明专利]基于氨基酸代谢组学研究苏格木勒抗失眠作用机理的方法

说明书

基于氨基酸代谢组学研究苏格木勒抗失眠作用机理的方法是应用GC‑MS法对苏格木勒灌胃前后PCPA失眠模型大鼠大脑各组织中氨基酸代谢组进行分析，标准图谱库指认内源性化合物，采用PCA和PLS‑DA模式分析大脑各部位代谢物谱的变化并鉴定相关代谢标志物；应用LC‑MS开展靶向代谢组学研究，考察脑组织中5‑羟基色胺、GABA、Glu等神经递质及相关代谢物含量变化；通过寻找临床大鼠脑组织样本中与苏格木勒疗效相关的差异代谢物及其代谢通路，明确苏格木勒抗失眠作用机制及作用位点；本发明首次应用代谢组学研究手段，初步探明苏格木勒通过神经递质系统调控睡眠‑觉醒节律的作用机理。

技术领域

本发明属于中医药技术和代谢组学技术的交叉技术领域，具体地 说是基于氨基酸代谢组学研究苏格木勒抗失眠作用机理的方法。

背景技术

睡眠约占正常人每天三分之一的时间,是维持人体正常生命活动 的一个重要的生理过程。近年来,随着经济的快速发展,生活节奏不断 加快,职业及环境压力越来越大，失眠的发生率也不断上升，且呈年 轻化的趋势也越来越明显，严重影响了人们的正常的工作、生活和健 康。失眠已经成为神经内科门诊中常见病、多发病，以难以入睡、易 醒、多梦、早醒、醒后不易再睡或醒后不适等为临床表现。苏格木勒 -3汤是蒙医传统药方,出自蒙医经典著作《四部医典》,《蒙医百科 全书》、《蒙药方剂学》均有记载。本研究根据查干夫教授改良后传统 配方，在原方白豆蔻15g，白苣胜10g，荜菝5g的基础上，添加炒酸 枣仁15g。主治失眠，为安神的良药。方中酸枣仁味甘，性平，白豆 蔻味苦，辛，性温，为镇赫依主药；白苣胜味甘、性平，为镇赫依辅 助药；加配调理体素药荜菝，四药合用，相互协调，成为赫依病之专 药。

睡眠是一个非常复杂的过程，中枢神经递质代谢异常及相应受体 功能改变是目前对该病发病机制及治疗的研究热点之一。单胺类神经 递质5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和氨基酸 类神经递质γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(G1u)都参与了睡眠机制的 调节，任何一种递质含量的变化及不同递质间比例的失调都会影响它 们之间的平衡关系而导致失眠。5-HT是引起睡眠发生的重要化学物 质,其神经元主要位于低位脑干近中线区的中缝核内，失眠患者普遍 伴随5-HT含量的降低。艾司米氮平作为H1/5-HT_2A受体拮抗剂可以显 著的改善入睡困难，延长睡眠时间，酸枣仁汤能与5-HT及GABA受体 结合，高剂量酸枣仁汤(4g/kg/2ml)显著增加非眼动睡眠(NREMS) 时间，加入5-HT受体拮抗剂可消除NREMS时间的增长。DA是NE的 前体物质，是下丘脑和脑垂体腺中的一种关键神经递质，属于兴奋性 神经递质，若刺激使其含量增加，则动物觉醒增加，睡眠减少，NE 在不同部位有着显著差异的特定作用。睡眠剥夺模型下丘脑、脑干内 5-HT含量明显下降，NE、DA含量明显升高。GABA是中枢神经系统中 最重要的抑制性递质,中枢神经系统中大约有20％-40％的中枢突触主 要是以GABA作为神经递质。睡眠剥夺动物模型与空白组相比，大鼠 脑内下丘脑、脑干GABA含量下降，Glu含量增加。多项研究结果也 表明药物可通过改变神经递质含量改善睡眠,从天麻中分离得到的腺 嘌呤苷类似物B2能通过增加大鼠大脑皮层和下丘脑GAD酶活性和 GABA浓度，缩短睡眠潜伏期延长NREM睡眠。目前常见的抗失眠药 物为苯二氮卓类药物和非“Z”抗失眠药物，其作用靶点是GABA受体， 存在药物起效慢，副作用大等特点，目前失眠治疗存在较大的挑战， 究其原因，与失眠病理生理机制尚不明确存在紧密相关。