[发明专利]一种改良CIK细胞培养基及其使用方法

说明书

本发明公开了一种改良CIK细胞培养基及其使用方法，包括下列原料制成：FBS100～200ml/L；谷氨酰胺1～2mmol/L；青霉素100μg/L；链霉素100μg/L；HEPES20～100mmol/L；丙酮酸钠8～15mmol/L；β‑巯基乙醇20～50μmol/L；适量核苷酸与脱氧核苷酸，本发明改良CIK培养基培养的CIK细胞增殖好、纯度高、细胞毒性极强，有明显的肿瘤细胞杀伤效应；本发明改良了传统CIK培养基的配方，并验证其抗瘤活性及安全性，能清除CIK细胞免疫治疗领域的一个重要障碍，为CIK细胞用作自体细胞治疗产品服务临床提供重要的理论支持。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体的说，是一种改良CIK细胞培养基及其使用方法。

背景技术

多种细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokines induced killers，CIK)具有T细胞的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤特点，1991年，由斯坦福大学的Schmidt-Wolf等首次报道，目前已成为免疫治疗多种恶性肿瘤应用最为广泛的细胞之一。CIK细胞应用于临床需要足够的数量及良好的活性和细胞毒作用。

传统RPMI1640培养基培养出的CIK细胞增殖有限，杀瘤活性较弱，服务于临床还面临一定的问题。

综上，如何克服现有技术的不足，研究出一种新的或者改良的CIK培养基，并具有良好的杀瘤活性是生物领域亟需解决的问题。

发明内容

为了弥补以上不足，本发明提供了一种改良CIK细胞培养基及其使用方法。

本发明的方案是：

一种改良CIK细胞培养，包括下列原料制成：

适量核苷酸与脱氧核苷酸。

作为优选的技术方案，包括下列原料制成：

适量核苷酸与脱氧核苷酸。

作为优选的技术方案，还包括下列原料：

IFN-γ 500～1000U/ml；

鼠抗人CD3单抗 50～100ng/ml；

IL-2 500～1000U/ml。

作为优选的技术方案，还包括下列原料：

IFN-γ 1000U/ml；

鼠抗人CD3单抗 50ng/ml；

IL-2 1000U/ml。

本发明还提供一种改良CIK细胞培养基的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)，采用Ficoll淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，调整细胞密度至1×10⁹个/L，悬于含100～200ml/L的FBS；1～2mmol/L的谷氨酰胺；100μg/L的青霉素、100μg/L的链霉素；20～100mmol/L的HEPES；8～15mmol/L的丙酮酸钠；20～50μmol/L的β-巯基乙醇；适量核苷酸与脱氧核苷酸的CIK细胞培养基中；