[发明专利]酶活性的检测方法、检测装置在审
申请号: | 201911304450.9 | 申请日: | 2019-12-17 |
公开(公告)号: | CN112980923A | 公开(公告)日: | 2021-06-18 |
发明(设计)人: | 向亮;刘力维;徐君 | 申请(专利权)人: | 华为技术有限公司 |
主分类号: | C12Q1/48 | 分类号: | C12Q1/48;C12M1/00;C12M1/34 |
代理公司: | 北京龙双利达知识产权代理有限公司 11329 | 代理人: | 王龙华;章愫 |
地址: | 518129 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 活性 检测 方法 装置 | ||
1.一种酶活性的检测方法,其特征在于,包括:
使用酶将碱基与第一基因片段进行聚合,获得第二基因片段和副产物;
根据所述副产物检测所述酶的活性。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:
所述酶为末端核苷酸转移酶,所述碱基为修饰碱基,所述副产物为焦磷酸分子PPi。
3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,
所述根据所述副产物检测所述酶的活性,包括:
通过检测所述PPi的荧光值来检测所述酶的活性。
4.根据权利要求2或3所述的检测方法,其特征在于:
所述修饰碱基与所述第一基因片段的比值大于或等于10000:1。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的检测方法,其特征在于,所述使用酶将碱基与第一基因片段进行聚合,包括:
在反应缓冲液中,使用所述酶将所述碱基与所述第一基因片段进行聚合,其中,所述反应缓冲液满足以下一项或多项条件:
所述反应缓冲液包括二甲胂酸钾,所述二甲胂酸钾的浓度满足:大于或等于0.1摩尔/每升mol/L,且小于或等于1mol/L;
所述反应缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷溶液,所述三羟甲基氨基甲烷溶液的浓度满足:大于或等于0.1摩尔/每升mol/L,且小于或等于0.5mol/L;
所述反应缓冲液包括聚乙二醇辛基苯基醚,所述聚乙二醇辛基苯基醚的体积分数满足:大于或等于0.01%,且小于或等于0.1%;
所述反应缓冲液包括氯化钴,所述氯化钴的浓度满足:大于或等于1毫摩尔/每升mmol/L,且小于或等于50mmol/L。
6.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于:
所述反应缓冲液成分包括:1mol/L所述二甲胂酸钾,0.125mol/L所述三羟甲基氨基甲烷溶液,体积分数为0.05%的所述聚乙二醇辛基苯基醚,5mmol/L所述氯化钴。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的检测方法,其特征在于,所述根据所述副产物检测所述酶的活性,包括:
根据所述副产物的含量来检测所述酶的活性。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的检测方法,其特征在于,所述方法还包括:
在所述酶的活性不满足预设条件的情况下,对所述酶进行随机突变,获得突变后的酶;
使用所述突变后的酶将所述碱基与所述第一基因片段进行聚合。
9.一种酶活性的检测装置,其特征在于,包括:
反应模块,用于使用酶将碱基与第一基因片段进行聚合,获得第二基因片段和副产物;
检测模块,用于根据所述副产物检测所述酶的活性。
10.根据权利要求9所述的检测装置,其特征在于:
所述酶为末端核苷酸转移酶,所述碱基为修饰碱基,所述副产物为焦磷酸分子PPi,所述检测模块具体用于:
通过检测所述PPi的荧光值来检测所述酶的活性。
11.根据权利要求9或10所述的检测装置,其特征在于,所述反应模块具体用于:
在反应缓冲液中,使用所述酶将所述碱基与所述第一基因片段进行聚合,
其中,所述反应缓冲液满足以下一项或多项条件:
所述反应缓冲液包括二甲胂酸钾,所述二甲胂酸钾的浓度满足:大于或等于0.1摩尔/每升mol/L,且小于或等于1mol/L;
所述反应缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷溶液,所述三羟甲基氨基甲烷溶液的浓度满足:大于或等于0.1摩尔/每升mol/L,且小于或等于0.5mol/L;
所述反应缓冲液包括聚乙二醇辛基苯基醚,所述聚乙二醇辛基苯基醚的体积分数满足:大于或等于0.01%,且小于或等于0.1%;
所述反应缓冲液包括氯化钴,所述氯化钴的浓度满足:大于或等于1毫摩尔/每升mmol/L,且小于或等于50mmol/L。
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