[发明专利]一种降钙素原检测试剂盒、制备方法及用途

说明书

本发明涉及一种降钙素原检测试剂盒、制备方法及用途。本发明的试剂盒包括：包被于磁性微球的第一株抗体、标记有示踪标记物的第二株抗体和校准品；所述第一株抗体和所述第二株抗体所识别的降钙素原的特异性结合位点不同；所述校准品包括降钙素原抗原A、稀释液，所述降钙素原抗原A为如SEQ ID NO:1所示的序列，所述稀释液包括缓冲液和蛋白稳定剂。该校准品存储稳定性高，该试剂盒基质效应低且能够快速的得到检测结果。

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体涉及一种降钙素原检测试剂盒、制备方法及用途。

背景技术

降钙素原(procalcitonin，PCT)是降钙素(calcitonin，CT)的前体物质，是一种由116个氨基酸的残基组成，相对分子质量为13000的糖蛋白；不具有激素活性，是11号染色体上的Calci基因的编码产物。自1993年Assicot等首次报道出PCT可作为细菌感染的早期的标志物以来，已作为一个新的炎症指标，广泛应用在感染性疾病的诊断及鉴别诊断，目前被公认为是最敏感、最有特异性的脓毒血症诊断的指标。

在正常情况下，人体甲状腺滤泡旁细胞(C细胞)内转录生成CalcimRNA后，翻译成PCT前体，经糖基化和特异性酶切除后生成PCT，再经过不同蛋白水解酶酶解，形成成熟的CT和抗钙素(katacalcin，KC)，成熟的CT的C末端酰胺化才会形成有活性的CT。除生理情况下，C细胞内的合成分泌，PCT还存在异位分泌现象。甲状腺切除术后合并严重感染患者血浆PCT仍然升高。甲状腺髓样细胞癌和小细胞肺癌可同时合成CT和PCT，使血浆CT和PCT升高。LPS、白介素(IL)-1、IL-2、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对PCTmRNA表达呈正刺激效应，可以在短时间内诱导PCT的大量生成。严重细菌感染或者脓毒症时，血浆PCT显著升高，其升高的程度与感染的严重程度呈显著的正相关；而CT并无显著变化，提示在炎症条件下PCT和CT的产生是两个相对独立的过程。

PCT是一种次级炎症因子，其本身不能启动脓毒症反应，但是PCT可放大并加重脓毒症病理过程。脓毒症时血浆PCT水平异常升高，提示PCT在急性免疫反应方面具有某些病理生理功能，但目前尚未完全明了。

PCT产物仅在黏附的单核细胞以及脂肪细胞中出现，在循环粒细胞中并没有发现。系统性炎症会影响组织和单核细胞的黏附，影响其PCT的产生，PCT升高的程度取决于机体发生炎症的范围以及其严重程度，而病毒感染以及自身免疫性疾病则不能诱导PCT的产生。

PCT在体内被特异的蛋白水解酶所降解，其半衰期约为25～30h，很少经肾排出，血浆PCT的肾脏清除率小于1mL/min。对于肾衰竭患者，其血浆PCT水平并无明显升高，血浆PCT水平与尿液PCT水平比例约为4：1，该比例保持相对恒定。持续静脉血液滤过或者血液透析虽然可以清除部分PCT，但血浆PCT水平并无显著的变化。因此，血浆PCT的检测也适用于肾衰竭或接受人工肾治疗的患者。

临床常用PCT检测方法主要包括定量法及半定量法：

半定量法主要包括胶体金比色法，采用专门制备好的PCT-Q检测卡，简便快捷，整个检测过程不超过30min，结果分为4级：正常0.5ng/mL；轻度升高0.5ng/mL；明显升高2ng/mL；显著升高10ng/mL。此法不依赖仪器、操作简便、快速，适合床旁监测或即时检验(POCT，point-of-care testing)。缺点是不能准确定量。

定量检测包括放射免疫学分析法、化学发光法、透射免疫浊度法等。其中，放射免疫学分析法：检测的是游离降钙素原、结合型降钙素原和降钙素基因相关肽前体的混合物，而不能区分上述3种物质。其检测灵敏度为4ng/L，线性范围为10-77ng/L。该法检测耗时长(19-22h)，而且有放射性元素的污染，使用受到限制。

双抗夹心免疫化学发光法：使用2个单克隆体，分别结合到降钙素原分子的2个部位，这样可排除交叉反应。其检测低限值为0.02ng/mL。该法操作简便、无污染、特异性强、敏感性高，可批量进行检测。