[发明专利]一种曲霉菌的化学发光检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种曲霉菌的化学发光检测试剂盒及其应用，所述试剂盒包括捕获抗体和信号抗体，所述捕获抗体和所述信号抗体为抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链可变区包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。本发明的抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体为兔源单克隆抗体，特异性好、稳定性好，与曲霉菌半乳甘露聚糖的亲和力强，可以快速与曲霉菌半乳甘露聚糖进行结合，缩短了检测时间；在进行半乳甘露聚糖的检测过程中，通过调整试剂的添加顺序，克服了待测样本中的生物素对结果造成的干扰。

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，涉及一种曲霉菌的化学发光检测试剂盒及其应用。

背景技术

侵袭性真菌病(invasive fungal disease，IFD)指真菌侵入人体后，在组织、器官或血液中生长繁殖，导致炎症反应和组织损伤的感染性疾病。近年来由于抗生素的滥用，侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis，IA)的发病率逐年升高，临床表现为咳嗽、咳痰、咯血、胸痛和呼吸困难等肺部感染症状，慢性阻塞性肺病、AIDS、粒细胞缺乏、器官移植和血液病/恶性肿瘤患者是侵袭性曲霉病的高危人群。其中，IA在血液病和造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplants，HSCT)患者中的死亡率高达70％～90％，造成高死亡率的主要原因在于不能在病程早期对IA进行检测诊断，以至患者得不到及时有效的治疗，因此，对IA进行早期诊断具有重要的意义。

半乳甘露聚糖(Galactomannan，GM)是曲霉菌细胞壁的主要成分，被认为是感染曲霉后最早释放入血的标志性抗原，释放量与菌体量成正比，可以反映曲霉的感染程度。目前，GM试验是侵袭性曲霉感染的早期诊断方法，已被国内外专家共识并被指南推荐。侵袭性肺曲霉病的临床诊断方法主要包括影像学检查、组织病理学检查、培养及镜检、血清G试验/GM试验和分子生物学检测方法。

截至2019年1月，针对曲霉的检测产品已有多种，具有代表性的产品如表1所示。目前，曲霉检测的主要方法为免疫分析方法，但是存在检测时间长、准确性低的问题；分子诊断技术由于受到检测环境和样本前处理步骤的影响，对结果的准确性具有一定的干扰，应用范围有限；胶体金法具有检测时间短的优势，但是存在检测限高、灵敏度差、诊断结果依赖肉眼判断的缺陷。

表1曲霉检测现有的部分产品信息

化学发光免疫技术由于具有高灵敏度、检测时间短和自动化等特点，逐渐应用于曲霉菌的检测。然而现有的化学发光诊断试剂盒，为了缩短反应时间，大多采用一步法操作，由于生物素标记抗体与样品和亲和素磁珠同时进行反应，样品中的生物素必然会干扰生物素标记抗体与亲和素磁珠的结合，影响结果的准确性。

因此，有必要提供一种新的化学发光检测试剂盒，应用于曲霉检测领域。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了一种曲霉菌的化学发光检测试剂盒及其应用，所述试剂盒具有检测速度快、灵敏度高、准确性好、自动化程度高的优势，有利于为侵袭性曲霉病的快速临床诊断提供有力依据。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种曲霉菌的化学发光检测试剂盒，所述试剂盒包括捕获抗体和信号抗体，所述捕获抗体和所述信号抗体为抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；

所述单克隆抗体的轻链可变区包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；

SEQ ID NO:1：