[发明专利]一株硫酸多粘菌素B单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

权利要求书

1.一株硫酸多粘菌素B单克隆抗体杂交瘤细胞株OVA17，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年10月14日，保藏编号CGMCCNo.18516。

2.硫酸多粘菌素B单克隆抗体，其特征在于：它由权利要求1所述保藏编号为CGMCCNo.18516的硫酸多粘菌素B单克隆抗体杂交瘤细胞株OVA17分泌产生。

3.权利要求2所述硫酸多粘菌素B单克隆抗体的应用，其特征在于：用于食品安全检测中硫酸多粘菌素B残留的分析检测。

4.权利要求1所述杂交瘤细胞株OVA17的制备方法，其特征在于：其通过硫酸多粘菌素B的完全抗原免疫小鼠后，经过培养筛选出小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞两种细胞融合后的杂交细胞；再经过间接竞争酶联免疫法筛选细胞并三次亚克隆，得到杂交瘤细胞株OVA17。

5.根据权利要求4所述杂交瘤细胞株OVA17的制备方法，其特征在于所述硫酸多粘菌素B的完全抗原的制备过程如下：采用硫酸多粘菌素B，即PMB作为硫酸多粘菌素B半抗原，随后采用双功能交联剂6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯GMBS将PMB半抗原与载体蛋白偶联以制备硫酸多粘菌素B的完全抗原。

6.根据权利要求5所述杂交瘤细胞株OVA17的制备方法，其特征在于所述PMB的结构式如下：

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7.根据权利要求5所述杂交瘤细胞株OVA17的制备方法，其特征在于所述硫酸多粘菌素B的完全抗原的制备具体为：称取PMB 14mg，加入1.5 mL 0.1M PBS溶解，充分溶解后向其中加入0.5 mL溶有2.8 mg GMBS的四氢呋喃溶液，并于30℃搅拌30 min；氮吹除去四氢呋喃，再用3 mL乙醚-二氯甲烷混合溶液洗涤多次，除去多余的GMBS，最终获得PMB-GMBS溶液，即A液；取10mg BSA，溶解于0.2 mL 0.1M PBS中，并加入50 µL现配的0.5M羟胺溶液，25℃搅拌10 min后加入3mL含3M尿素的0.1M PBS缓冲液稀释，获得B液；将B液立即加入到A液中，并于25℃剧烈搅拌30min；混合液用0.01M PBS溶液透析，除去未反应的小分子半抗原，得到完全抗原PMB-GMBS-BSA，并通过紫外吸收扫描方法进行鉴定。

8.根据权利要求7所述杂交瘤细胞株OVA17的制备方法，其特征在于：所述乙醚-二氯甲烷混合溶液为，乙醚：二氯甲烷的体积比为2：1。