[发明专利]一种外周血中的肿瘤细胞株数量的检测方法

说明书

本发明为肿瘤细胞检测提供一个可靠的内控质量控制方法，在精确的知道检测技术上限的同时准确的计算出细胞的回收率而得出整体循环肿瘤细胞的数目，极大的提升检测的可信度。本发明所述的方法，包括以下步骤：1)外周血样本的获得，2)向外周血样本注入已知数目的肿瘤细胞株及仿真人工合成荧光圆珠，3)采用以下技术对外周血肿瘤细胞进行富集，4)显微镜下辨认及计数余下的肿瘤细胞株及荧光圆珠，得出细胞株及荧光圆珠的富集率。

技术领域：

本发明涉及一种外周血中的肿瘤细胞株数量的检测方法。

背景技术：

日常如果发现患有肿瘤的症状时，需及早诊断，及时治疗；早诊断的方法包括，检测外周血中的肿瘤细胞株数量。

现有技术公开了外周血中的肿瘤细胞富集方法，如：

Peter Ping Lin,Olivier Gires,Daisy Dandan Wang,Linda LiHongxia Wang(2017)Comprehensive in situ co-detection of aneuploid circulating endothelialand tumor cells.Sci Rep 7:9789□文献，公开了如何全面的检测到循环肿瘤细胞和异倍体上皮细胞。

P.Lin(2015)Integrated EpCAM-independent subtraction enrichment andiFISH strategies to detect and classify disseminated and circulating tumorscells.Clin Transl Med 4(38):1-7□文献。公开了如何利用非EpCAM依赖性的负向方法检测及归类循环肿瘤细胞。

Q.Chen,F.Ge,W.Cui,F.Wang,Z.Yang,Y.Guo,L.Li,R.Bremner,and P.Lin(2013)Lung Cancer Circulating Tumor Cells Isolated by the EpCAM-IndependentEnrichment Strategy Correlate with Cytokeratin 19-Derived CYFRA21-1 andPathological Staging.Clin Chim Acta 419:57-61□文献，公开了使用非EpCAM依赖性方法富集及检测肺癌循环肿瘤细胞。

但现有技术的缺陷在于，没法知道捕获到的细胞占整体肿瘤细胞总数的比例和准确数目，无法定量。

目前需要提供定量数据，并制定一种捕获到的肿瘤细胞占整体肿瘤细胞总数的比例的标准，根据该标准，判断肿瘤细胞的发生，发展，治疗效果等，可用于肿瘤的检测，排除假阳性，判断药物的治疗效果。

发明内容：

本发明为肿瘤细胞检测提供一个可靠的内控质量控制方法，在精确的知道检测技术上限的同时准确的计算出细胞的回收率而得出整体循环肿瘤细胞的数目，极大的提升检测的可信度。

本发明的检测方法，步骤如下：

同时加入已知数目的细胞株及仿真人工合成荧光圆珠，完成整个富集流程后，在显微镜下辨认及计数余下的细胞株及荧光圆珠，得出细胞株及荧光圆珠的富集率。经过多次实验证实荧光珠与细胞株的富集率高度一致并可以替代细胞株作为检测的可靠质量内控。

本发明所述的检测方法，包括以下步骤：

1)外周血样本的获得

採用体表浅静脉负压采血法抽取静脉血。首先消毒，左手拇指固定穿刺血管下端，右手拇指和中指持负压采血针，食指固定针头下座，使针头斜面和刻度朝上，以30度角方向沿静脉方向刺入皮肤，然后以5度角方向进入血管，见回血后在蝴蝶针的另一端插入真空採血管，让负压抽取6mL血。