[发明专利]一种间歇浸没式培养金钗石斛种苗的方法

说明书

本发明公开了一种间歇浸没式培养金钗石斛种苗的方法，包括如下步骤：种子萌发：将金钗石斛种子无菌播种到固体培养基上进行萌发培养；原球茎增殖培养：将萌发的种子无菌转接到原球茎增殖固体培养基上进行原球茎增殖培养；液体适应性培养：将培养得到的原球茎无菌接种到液体培养基中培养；间歇浸没培养：将完成适应性培养且无污染原球茎连同液体培养基一起倒入间歇浸没培养生长室中，进行间歇浸没培养。本发明间歇浸没式培养金钗石斛种苗的方法，具有培养周期短、移栽成活率高、自动化程度高、劳动力消耗少等优点，尤其是在间歇浸没培养过程中不移动组培苗，而是更换培养液，组培苗不受伤害，显著提高生产效率和培养质量。

技术领域

本发明属于中药材育苗领域，涉及一种金钗石斛种苗生产方法，具体涉及一种利用间歇浸没液体培养系统生产金钗石斛组培苗的方法。

背景技术

金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)为兰科石斛属(Dendrobium)珍稀药用植物，早在《神农本草经》中就有记载，为中国濒危物种，具有滋阴生津、润肺明目、抗癌防老等功效。

金钗石斛的种子极为细小，胚胎发育不完全，无胚乳组织，在自然状态下发芽率极低。加之长期以来掠夺性的采挖，致使野生的资源已近枯竭，处于濒危状态，远远不能满足国内外市场需求，造成市场供应紧缺。随着人工种植面积不断增加，优质种苗的需求量也越来越多。

应用植物组培快繁方法可获得遗传基础、外观品质等重要性状均一的繁殖体，是目前常用的扩繁石斛的方法，在一定程度上解决了石斛优质种苗短缺的现象。但是，传统的方法对于金钗石斛组培苗的获得具有许多难以避免的缺点：1)由于密封式培养，培养过程中无法进行气体的交换，致使组培苗出现玻璃化现象、种苗质量差，移栽成活率低；2)培养过程中需要大量的转接操作，并需要处理废弃的培养基，增加了劳动成本；3)由于组培瓶空间有限，组培苗需要不断的组培瓶生长，人为的转接造成不大量的污染损失，在转接的过程中也造成了组培苗的损伤，导致组培苗生长速度减慢，培养周期延长。

应用间歇浸没液体培养系统进行金钗石斛的生产可以弥补传统方法生产的缺陷，为低成本的生产高质量的种苗提供有效的方法。

利用间歇浸没培养反应器成功进行植物培养的研究已有报道。如专利号为ZL200910114406.1的“利用间歇浸没式间歇浸没培养系统进行甘蔗组织培养快繁”的研究，其对利用间歇浸没培养反应器对三个品种的甘蔗培养进行了介绍，同时也为利用此种培养方式进行其它种类植物的培养提供了技术启示。但是，一方面不同间歇浸没培养装置的操作方法不同；另一方面由于各种植物生理、生化上的不同，相同的培养方法对不同的植物培养不一样，需要大量的实验优化最佳培养条件，并不能通过简单的有限的实验推理来得到。文献专利中提及的步骤以及其中涉及到的具体的培养方式和培养条件完全不能用于金钗石斛种苗的培育。

然而，利用间歇浸没式培养方法进行金钗石斛组织培养快繁的方法未见报道和公开应用。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种间歇浸没式培养金钗石斛种苗的方法，该方法采用间歇浸没式培养，具有培养周期短、移栽成活率高、自动化程度高、劳动力消耗少等优点，尤其是在间歇浸没培养过程中不移动组培苗，而是更换培养液，组培苗不受伤害，显著提高生产效率和培养质量。

技术方案：为实现上述发明目的，如本发明所述一种间歇浸没式培养金钗石斛种苗的方法，包括如下步骤：

(1)种子萌发：将金钗石斛种子无菌播种到固体培养基上进行萌发培养；

(2)原球茎增殖培养：将萌发的种子无菌转接到原球茎增殖固体培养基上进行原球茎增殖培养；

(3)液体适应性培养：将步骤(2)培养得到的原球茎无菌接种到液体培养基中适应性培养；