[发明专利]一种犬干扰素突变体重组融合蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种犬干扰素突变体重组融合蛋白，其特征在于，该重组融合蛋白由犬干扰素α突变体与蓖麻毒素B链蛋白经柔性linker连接而形成；其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.如权利要求1所述的一种犬干扰素突变体重组融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、CaIFNα突变表达载体构建；

步骤二、大肠杆菌重组表达载体构建；

步骤三、重组CaIFNα-Mut/RTB融合蛋白表达；

步骤四、纯化与复性。

3.根据权利要求2所述的一种犬干扰素突变体重组融合蛋白的制备方法，其特征在于，步骤一具体包括以下步骤：

设计定点突变引物，以重组质粒pUC57-CaIFNα/RTB为模板进行突变，将突变后的序列命名为CaIFNα-Mut/RTB，将CaIFNα-Mut/RTB连接至pMD18T载体，将测序正确的产物命名为：pMD18T-CaIFNα-Mut/RTB质粒，作为CaIFNα突变表达载体。

4.根据权利要求3所述的一种犬干扰素突变体重组融合蛋白的制备方法，其特征在于，步骤二具体包括以下步骤：

分别对测序正确的pMD18T-CaIFNα-Mut/RTB质粒和pET28a载体进行双酶切，反应体系及条件见下表，将双酶切产物进行胶回收；利用T4连接酶将胶回收后的两个产物进行连接，连接体系及条件见下表；

试剂名称	用量
T4DNALigase	1μL
10×T4DNALigaseBμffer	4μL
回收的CaIFNα目的片段	4μL
回收的pET28A载体片段	1μL
反应条件	16℃过夜

将上述连接产物转化至Trans10感受态细胞；转化后涂布至终浓度为100μg/mLKan+抗性的LB固体平板，培养过夜后，挑取长势良好的多个白色单菌落，扩大培养并进行PCR；将PCR鉴定正确的阳性质粒进行测序分析。