[发明专利]一种检测噻虫嗪残留的方法

权利要求书

1.一种检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将上转换纳米颗粒与噻虫嗪抗体偶联，得到噻虫嗪抗体-UCNPs偶联物；

(2)用金纳米颗粒标记噻虫嗪抗原，得到噻虫嗪抗原-AuNPs结合物；

(3)噻虫嗪与噻虫嗪抗体-UCNPs偶联物以及噻虫嗪-抗原AuNPs结合物之间发生竞争性免疫反应，利用上转换纳米颗粒与金纳米颗粒之间的内滤波效应获得不同的荧光检测信号值，计算得到噻虫嗪残留量。

2.根据权利要求1所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述噻虫嗪抗体-UCNPs偶联物的制备方法包括：将COOH-UCNPs颗粒用N-N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺在水溶液中震荡活化，得到活性颗粒；将活性颗粒与噻虫嗪抗体于磷酸缓冲液中混合反应，得到噻虫嗪抗体-UCNPs偶联物。

3.根据权利要求2所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述噻虫嗪抗体-UCNPs偶联物悬浮在储备溶液中，所述储备液为含有1％牛血清白蛋白、0.1％吐温-20和1％海藻糖的0.03M pH7.4的磷酸缓冲液。

4.根据权利要求1所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述金纳米颗粒用柠檬酸钠还原法制备。

5.根据权利要求4所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述金纳米颗粒的制备方法包括：将氯化金水溶液在冷凝回流条件下加热至沸点，搅拌下加入柠檬酸三钠溶液，当溶液的颜色从深蓝色变为酒红色时，再加热后冷却，得到含有金纳米颗粒的悬浮液。

6.根据权利要求1所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述噻虫嗪抗原-AuNPs结合物的制备方法包括：调节胶体金颗粒悬浮液的pH值至8.0，将噻虫嗪抗原加入上述溶液中搅拌孵育，得溶液I；向溶液I中加入含有牛血清白蛋白和聚乙二醇的Tris-HCl溶液混合并搅拌，使溶液I中牛血清白蛋白的终浓度为1％，聚乙二醇的终浓度为1％，继续孵育后，离心得到噻虫嗪抗原-AuNPs结合物。

7.根据权利要求1或6所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，所述噻虫嗪抗原-AuNPs结合物分散在0.05M pH 8.5的Tris HCl混合溶液中，所述Tris HCl混合溶液包含1％牛血清白蛋白、1％聚乙二醇和5％蔗糖。

8.根据权利要求1所述检测噻虫嗪残留的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述利用荧光强度变化值与噻虫嗪浓度之间的关系建立标准曲线，利用标准曲线计算噻虫嗪浓度。