[发明专利]一种提高基因编辑效率的融合蛋白及其应用有效
| 申请号： | 201911310969.8 | 申请日： | 2019-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN112979821B | 公开（公告）日： | 2022-02-08 |
| 发明（设计）人： | 李大力;张晓辉;刘明耀 | 申请（专利权）人： | 华东师范大学;上海邦耀生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C12N15/113;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京君慧知识产权代理事务所(普通合伙) 11716 | 代理人： | 王振南 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 基因 编辑 效率 融合 蛋白 及其 应用 | ||
1.一种提高基因编辑效率的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括单链DNA结合蛋白功能域、核苷脱氨酶和核酸酶；
所述融合蛋白的连接顺序为：所述核苷脱氨酶位于所述核酸酶的N端，所述单链DNA结合蛋白功能域位于所述核苷脱氨酶和所述核酸酶之间；
所述单链DNA结合蛋白功能域包括Rad51的DNA结合结构域和/或RPA70的DNA结合结构域；
所述Rad51的DNA结合结构域的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；
所述RPA70的DNA结合结构域的氨基酸序列如SEQ ID No.19所示；
所述融合蛋白还包括NLS；
所述NLS位于所述融合蛋白的至少一端；
所述融合蛋白还包括两拷贝的UGI；
所述UGI位于所述融合蛋白的至少一端。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述单链DNA结合蛋白功能域为Rad51的DNA结合结构域。
3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述Rad51的DNA结合结构域的编码序列如SEQ ID No.2 所示。
4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述RPA70的DNA结合结构域的编码序列如SEQ ID No.20 所示。
5.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述核苷脱氨酶包括胞嘧啶脱氨酶和/或腺苷脱氨酶。
6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述核苷脱氨酶为胞嘧啶脱氨酶。
7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其特征在于，所述胞嘧啶脱氨酶为来源于大鼠的胞嘧啶脱氨酶。
8.根据权利要求7所述的融合蛋白，其特征在于，所述来源于大鼠的胞嘧啶脱氨酶氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。
9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其特征在于，所述来源于大鼠的胞嘧啶脱氨酶的编码序列如SEQ ID No.4所示。
10.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述核酸酶选自Cas9、Cas3、Cas8a、Cas8b、Cas10d、Cse1、Csy1、Csn2、 Cas4、Cas10、Csm2、Cmr5、Fok1、Cpf1中的一种或任意几种。
11.根据权利要求10所述的融合蛋白，其特征在于，所述核酸酶为Cas9。
12.根据权利要求11所述的融合蛋白，其特征在于，所述Cas9选自来源于肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、酿脓链球菌或嗜热链球菌的Cas9。
13.根据权利要求12所述的融合蛋白，其特征在于，所述Cas9选自Cas9突变体VQR-spCas9、VRER-spCas9、spCas9n。
14.根据权利要求13所述的融合蛋白，其特征在于，所述Cas9突变体为spCas9n。
15.根据权利要求14所述的融合蛋白，其特征在于，所述spCas9n的氨基酸序列如SEQID No.5所示。
16.根据权利要求15所述的融合蛋白，其特征在于，所述spCas9n的编码序列如SEQ IDNo.6所示。
17.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述NLS的氨基酸序列如SEQ IDNo.7所示。
18.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述NLS的编码序列如SEQ ID No.8所示。
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