[发明专利]一种利用基因编辑技术改变油菜种子脂肪酸组成的方法及其应用

权利要求书

1.一种利用基因编辑技术改变油菜种子脂肪酸组成的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，根据甘蓝型油菜BnaSAD.C4、BnaSAD.A5、BnaSAD.A3、BnaSAD.C3基因核苷酸序列设计并筛选五个碱基位点的靶点序列，并针对靶点序列设计引物，其中，所述BnaSAD.C4的碱基序列如SEQ ID NO：2所示；所述BnaSAD.A5的碱基序列如SEQ ID NO：3所示；所述BnaSAD.A3的碱基序列如SEQ ID NO：4所示；所述BnaSAD.C3的碱基序列如SEQ ID NO：5所示；五个靶点序列5＇- 3＇分别见SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10，引物序列分别见SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ IDNO：20；

S2，构建五靶点基因编辑载体pBnaSAD2载体，具体步骤如下:

扩增sgRNA 表达盒片段，其中扩增T1 sgRNA表达盒所用的引物见SEQ ID NO:23、SEQID NO:24，扩增T2 sgRNA表达盒所用的引物见SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26，扩增T3 sgRNA表达盒所用的引物见SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28，扩增T4 sgRNA表达盒所用的引物见SEQID NO:29、SEQ ID NO:30，扩增T5 sgRNA表达盒所用的引物见SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32；

将扩增得到的sgRNA 表达盒片段混合并与双元载体PYLCRISPR/CAS9 35S-H酶切连接，验证，即得pBnaSAD2载体；

S3，pBnaSAD2载体用受体材料甘蓝型油菜下胚轴遗传转化，即得油菜种子脂肪酸组成发生改变的突变体。

2.根据权利要求1所述的一种利用基因编辑技术改变油菜种子脂肪酸组成的方法，其特征在于，所述BnaSAD.C4、BnaSAD.A5、BnaSAD.A3、BnaSAD.C3基因是根据拟南芥fab2基因进行基因家族分析得到的。

3.如权利要求1-2任一项所述的利用基因编辑技术改变油菜种子脂肪酸组成的方法在油菜育种中的应用。