[发明专利]一种呼吸道合胞病毒和副流感病毒联合检测胶体金层析试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种呼吸道合胞病毒和副流感病毒联合检测胶体金层析试剂盒及其应用。该试剂盒通过将采集的样本经细胞裂解液裂解后释放病原体核酸，然后在逆转录酶和T7RNA聚合酶的作用下，经过逆转录和转录过程，实现病原体核酸片段的扩增。扩增后的RNA产物被检测液中的特异探针识别捕获，形成RNA扩增产物‑‑‑特异探针‑‑‑金探针复合物，该复合物通过侧向流层析在NC膜上被固定形成可见的条带，实现病原体核酸的检测。本发明没有RNA的提取过程，不需要特殊仪器，基于RNA恒温扩增，在实际检测中不易污染，具有灵敏度高、特异性强以及操作简单的优势，使呼吸道合胞病毒和副流感病毒核酸检测得到广泛应用成为一种可能。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种呼吸道合胞病毒和副流感病毒联合检测胶体金层析试剂盒及其应用。

背景技术

呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)是单链RNA包膜病毒，含有两个亚型—A型和B型。广泛分布于世界各地，是引起婴幼儿下呼吸道感染主要的和常见的病原体，在绝大部分地区RSV所致的1岁以内婴幼儿的肺炎和支气管炎远远高于其他病原微生物。RSV的流行具有季节性，易于在冬天和早春感染并引起多达5个月的流行期。我国每年数千万住院的婴幼儿因RSV感染的占50％，且RSV的再感染率很高，成人RSV的再感染同样很常见。该病毒具有传染性强，症状与副流感病毒肺炎、轻流感病毒肺炎及轻症腺病毒肺炎在临床上几乎无法区别，因此，实验室诊断就显得非常重要。

副流感病毒(Parainfluenza virus，PIV)是单链RNA包膜病毒，四种亚型各有不同的临床和流行病学特征。1型和2型的最典型的临床特征是造成儿童喉气管支气管炎，1型是儿童喉气管支气管炎的主要原因，而2型次之。1型2型均能造成其他的上呼吸道和下呼吸道疾病。3型经常导致肺炎和细支气管炎。4型通常被认为散发存在，引起的呼吸道症状轻微。副流感病毒是常常引起儿童下呼吸道感染的一种病毒，其致病性仅次于呼吸道合胞病毒(RSV)。人类副流感病毒的潜伏期一般在1～7天左右。

RSV和PIV感染的实验室诊断方法有很多，一般可以分为实验室分离培养，免疫学技术检测和分子生物学诊断。分离培养是最传统的检测，该方法虽然可靠，但耗时长，因此使该方法无法在临床上得到有效应用。免疫学检测主要包括免疫荧光法、酶联免疫法和胶体金法等。免疫学检测方法简便快捷，也是现在临床上常用的检测方法，但抗原检测灵敏度低，抗体检测窗口期长。分子生物学方法包括荧光PCR、RNA恒温扩增等，可直接检测核酸，灵敏度高、特异性强，检测速度也较快，在缩短检测窗口期、提高病原体检出率方面具有相当的优势，目前分子生物学检测在流感病毒的诊断中被应用的越来越广泛，成为流感病毒检测的主要方法之一。但是PCR的方法对硬件设施有一定的要求，要有专门的PCR诊断实验室、昂贵的实验仪器，不利于在一些社区及偏远医院的普及应用。因此，人们仍然需要寻找一种操作简单、快速、价格低廉的RSV和PIV的诊断方法。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种基于RNA恒温扩增-金探针层析技术联合检测RSV(包括A型和B型)和PIV(包含PIV1、2、3分型)核酸的试剂盒及其应用。该试剂盒通过将采集的样本经细胞裂解液裂解后释放病原体核酸，然后在逆转录酶和T7RNA聚合酶的作用下，经过逆转录和转录过程，实现病原体核酸片段的扩增。扩增后的RNA产物被检测液中的特异探针识别捕获，形成RNA扩增产物---特异探针---金探针复合物，该复合物通过侧向流层析在NC膜上被固定形成可见的条带，实现病原体核酸的检测。因此，本发明没有复杂的RNA提取过程，也不需要特殊的仪器，基于RNA分子易降解的特点，本发明在实际检测中不易污染，具有灵敏度高、特异性强以及操作简单的优势，使RSV(包括A型和B型)和PIV(包含PIV1、2、3分型)核酸检测得到广泛应用成为一种可能。

为了实现上述目标，本发明采用如下技术方案：

第一方面，提供一种呼吸道合胞病毒和副流感病毒核酸联合检测胶体金层析试剂盒，所述试剂盒是基于RNA恒温扩增-金探针层析技术，包括：