[发明专利]一种柔红霉素衍生物及其制备方法与柔红霉素检测试剂

说明书

本发明公开了一种用于人体生物样本中柔红霉素含量检测的柔红霉素衍生物及其制备方法。使用该柔红霉素衍生物获得了3种高免疫原性的柔红霉素免疫原与相应的3种抗柔红霉素特异性抗体以及3种柔红霉素酶标偶联物，并制备出了3种灵敏度高、特异性强、检测效果好的柔红霉素免疫学检验试剂。本发明还提供了3种柔红霉素免疫检验试剂的制备方法及相应的使用方法。本发明提供的3种柔红霉素免疫检测方法操作方便、检测快速、结果准确、灵敏度高、特异性强，能够对人体血液样本中的柔红霉素含量进行定量检测。克服了现有技术中柔红霉素检测方法存在的操作复杂、自动化程度低等缺陷，能有效指导临床个体化合理用药。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种柔红霉素衍生物及其制备方法与柔红霉素检测试剂。

背景技术

柔红霉素（Daunorubicin），其化学结构式如式Ⅷ所示：

式Ⅷ。

柔红霉素是一种强效蒽环类抗肿瘤抗生素，主要用于治疗对常用抗肿瘤药物产生耐药性的急性粒细胞白血病或急性淋巴细胞白血病，对淋巴肉瘤、神经母细胞瘤、骨骼肌瘤、绒癌也有一定疗效。柔红霉素的作用机理与阿霉素类似，能直接与DNA结合，抑制DNA复制与RNA合成，对RNA的影响尤为显著，能选择性地作用于嘌呤核苷。使用柔红霉素治疗的不良反应较多，主要包括：1.较为严重的骨髓抑制；2.口腔溃疡（此不良反应多在骨髓毒性之前出现）；3.胃肠道反应（恶心、呕吐、腹痛等）；4.心脏毒性，可引起心肌损害、心电图异常、心律失常、严重者可致心力衰竭，滴速过快时也可出现心律失常；5.漏出血管外时可致局部组织坏死等。因此，对使用柔红霉素进行治疗的患者需要进行严格的血药浓度监测，以保证血药浓度控制在有效的治疗范围之内，能显著提高治疗效果并减少不良反应，对临床合理用药与个体化治疗也具有重要意义。

传统的柔红霉素检验方法主要有：高效液相色谱法(HPLC)与液相色谱/串联质谱联用法(LC/MS-MS)等，这些方法操作复杂、速度较慢、且成本较高。而利用新型柔红霉素衍生物研制的抗柔红霉素特异性系列抗体可以用于制备多种灵敏度高、特异性强、检测效果好的柔红霉素免疫检验试剂，能有效弥补传统方法的缺点。本发明的3种柔红霉素检测试剂，可以对柔红霉素的含量进行定量检测，有效指导临床个体化合理用药。与HPLC、LC/MS-MS等传统方法相比，本发明提供的免疫检测方法具有操作简便、检测快速快、结果准确、费用低廉等优势，有利于将来临床大规模推广应用，特别是对于缺乏昂贵仪器的基层医院具有良好的应用前景。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明所采用的技术方案是：

一、提供一种柔红霉素衍生物，该衍生物为新合成物质，自然界中不存在，其结构式如式Ⅰ所示：

式Ⅰ。

二、提供一种如上所述的柔红霉素衍生物的合成方法，该合成方法有别于常规合成方法，并具有良好的合成效果，显著提高柔红霉素衍生物的合成效率，具体合成路线如下所示：

。

三、提供一种柔红霉素均相酶免疫检测试剂，该检测试剂由R1试剂与R2试剂组成，所述R1试剂包含抗柔红霉素特异性抗体1与R1缓冲液，所述R2试剂包含柔红霉素葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记偶联物与R2缓冲液；所述抗柔红霉素特异性抗体1为柔红霉素人转铁蛋白免疫原免疫实验动物后生产得到的抗体；所述的柔红霉素血蓝蛋白免疫原，由上述的柔红霉素衍生物与血蓝蛋白偶联而成，其结构式如式Ⅱ所示：

式Ⅱ；

所述的实验动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的任意一种；

所述的R1缓冲液含有酶底物、辅酶、牛血清白蛋白及Tris缓冲液，所述的酶底物为葡萄糖-6-磷酸，所述的辅酶为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型；