[发明专利]一种基于RPA-LFS快速检测副溶血弧菌的特异性引物对、试剂盒及应用在审
| 申请号： | 201911318614.3 | 申请日： | 2019-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN110804670A | 公开（公告）日： | 2020-02-18 |
| 发明（设计）人： | 董井泉;郦娟;高嵩;杨潇含;余桂丽;赵盼盼;吉敬 | 申请（专利权）人： | 江苏海洋大学;连云港新酶众信息技术合伙企业;连云港海恒生化科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/6804;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/63 |
| 代理公司： | 北京和联顺知识产权代理有限公司 11621 | 代理人： | 闫超良 |
| 地址： | 222005 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 rpa lfs 快速 检测 溶血 弧菌 特异性 引物 试剂盒 应用 | ||
1.一种基于RPA-LFS快速检测副溶血弧菌的特异性引物对，包括特异性引物对以及探针，其特征在于，所述特异性引物及探针的序列为：
上游引物：5’-TCACGTTGTTTGATACTCACGCCTTGTTCG
下游引物：5’-Biotin-CTGTAACTTGTTTAGCGTTGTGACTGCAGTG
探针：
5’-FITC-GAAGAGCATGGTTTCGTGAACGCGAGCGAT[THF]CTTGTTTGGAG ATCA-SpC3
2.一种基于RPA-LFS快速检测副溶血弧菌的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的特异性引物对及探针、侧流层析试纸条；
所述探针的长度至少为46bp；
所述探针5’末端的修饰方式为：用FITC进行标记，3’末端的修饰方式为：引入3C-spacer进行末端封闭，在探针中间引入THF，即无嘌呤无嘧啶位点(AP位点)；
所述探针在AP位点前至少要保留30bp的碱基，在AP位点之后至少有15bp的碱基；
所述下游引物的5’末端的修饰方式为：标记生物素。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括水解缓冲液、双蒸水、副溶血弧菌DNA模板以及醋酸镁。
4.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述侧流层析试纸条通过与水解缓冲液和样品的混合物进行接触显色。
5.根据权利要求2-4任一项所述的一种基于RPA-LFS快速检测副溶血弧菌的试剂盒，其特征在于，采用所述试剂盒检测在35℃-45℃，20min内可以得到检测结果。
6.根据权利要求2-4任一项所述的一种基于RPA-LFS快速检测副溶血弧菌的试剂盒，其特征在于，采用所述试剂盒进行检测的检测下限为1CFU/反应。
7.权利要求1所述的引物对，以及权利要求2～6任一项所述的试剂盒在区分副溶血弧菌与其他弧菌以及其他细菌的样本中的应用，其特征在于，所述其他弧菌包括：创伤弧菌，溶藻弧菌，哈维是弧菌，霍乱弧菌，地中海弧菌，席罗弧菌，沙门氏菌，丹增李斯特菌，蜡样芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌。
8.根据权利要求7所述的应用检测，其特征在于，所述样本包含水产养殖对象，水产品加工食品，养殖环境等。
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