[发明专利]一种用于检测泰和乌鸡鸡蛋的引物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测泰和乌鸡鸡蛋的引物、试剂盒及检测方法，所述引物包括：如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3及SEQ ID NO：4所示。所述检测方法，包括以下步骤：提取待测鸡蛋基因组DNA，采用两步PCR方法对基因组DNA扩增，根据第二步PCR产物基因序列68bp处碱基进行基因分型，当该位置碱基为G时，为泰和乌鸡鸡蛋；当该位置基因为C时，为非泰和乌鸡鸡蛋。本发明所针对的变异位点为泰和乌鸡鸡蛋所特有的，利用该引物和检测方法可以100％准确的鉴定被检个体是否为泰和乌鸡鸡蛋，可排除不良商贩用非泰和乌鸡蛋或混有非泰和乌鸡鸡蛋的“泰和乌鸡鸡蛋”冒充泰和乌鸡蛋。

技术领域

本发明涉及分子生物检测技术领域，特别是涉及一种用于检测泰和乌鸡鸡蛋的引物、试剂盒及检测方法。

背景技术

泰和乌鸡养殖是泰和县域经济发展最具鲜明特色的优势产业，已经成为泰和县农业领域的一张名片。泰和乌鸡自古有名，随着经济社会发展和人民生活水平的提高，人们对优质、安全、健康的食品需求日益增多，泰和乌鸡鸡蛋的优质优价凸显，假的乌鸡蛋逐渐增多，而消费者大都不具备鉴别泰和乌鸡蛋的能力。这给很多不法的商家提供了违规操作的机会，不利于整体市场的正规化。

目前，尚无鉴别泰和乌鸡蛋的有效手段。最常见的两种方法：①是通过商家贴商标的办法；②建立产品可追溯系统，通过射频识别、二维码或者条形码技术全程追踪记录产品。但是上述手段都是建立在商家诚信的基础上，不良商家同样可以通过技术手段来用非乌鸡蛋冒充泰和乌鸡蛋。为保护泰和乌鸡产业健康发展，稳定泰和乌鸡蛋品质，规范乌鸡蛋市场，避免非乌鸡蛋冒充优质高价的乌鸡蛋。基因检测技术是可以直接检测DNA分子的碱基，准确度比较高。因此，利用基因检测技术，建立泰和乌鸡蛋的鉴别方法尤为迫切。鉴别泰和乌鸡蛋分子检测方法的建立，一来可以打击鱼目混珠者，防止不良商贩把乌鸡蛋市场搞乱；二来可以提升泰和乌鸡形象，进一步提升泰和乌鸡的品牌价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测泰和乌鸡鸡蛋的引物、试剂盒及检测方法，通过引物两步扩增鸡蛋基因组DNA，可以获取足量的用于测序分型的PCR产物，经过对PCR产物变异位点的鉴定，进而准确判断真伪泰和乌鸡鸡蛋。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种用于检测泰和乌鸡鸡蛋的引物，包括：如SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：3以及SEQ ID NO：4所示。

本发明还提供一种用于检测泰和乌鸡鸡蛋的检测方法，包括以下步骤：提取待测鸡蛋基因组DNA，采用两步PCR方法对所述基因组DNA进行扩增，根据所得的第二步PCR产物基因序列68bp处碱基进行基因分型，当该位置碱基为G时，为泰和乌鸡鸡蛋；当该位置基因为C时，为非泰和乌鸡鸡蛋。优选的是，第一步PCR扩增时，引物为权利要求1所述的SEQ IDNO：1和SEQ ID NO：2；

30μL扩增体系：模板DNA 2μL，2×PCR mix 15μL，混合引物0.6μL，其余为水；

扩增程序：95℃3min；94℃15s、55℃30s、72℃20s，20个循环；72℃，3min。

优选的是，第二步PCR扩增时，引物为权利要求1所述的SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4；

20μL扩增体系：第一次PCR产物1μL；2×PCR mix 10μL，混合引物0.4μL，其余为水；

扩增程序：96℃3min；96℃30s、52℃30s、72℃30s，35个循环。

本发明还提供所述的用于检测泰和乌鸡鸡蛋的检测方法在鉴别泰和乌鸡鸡蛋上的应用。

本发明还提供一种包含所述的用于检测泰和乌鸡鸡蛋的引物的试剂盒。