[发明专利]一种嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的制备和萌发方法及其应用

说明书

本发明公开了一种嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的制备和萌发方法及其应用，属于应用微生物技术领域。所述制备、萌发方法包括：（1）菌种活化；（2）芽孢制备；（3）芽孢萌发。本发明进一步包括芽孢快速复苏的萌发培养基及芽孢的应用。利用本发明制备嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢，芽孢产量高，制备周期短，抗性调节性大，采用液体诱导培养基，较固体平板诱导具有芽孢收集简单，可大规模制备等优势，并且适用于空间灭菌指示物的工作菌，如消毒学中的压力蒸汽灭菌，过氧化氢低温等离子体灭菌及鲜乳中抗生素残留检测等。

技术领域

本发明属于应用微生物技术领域，具体地，涉及一种嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的制备和萌发方法及其应用。

背景技术

嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）属嗜热性需氧芽孢杆菌，但兼有厌氧的特性，细菌繁殖体G兰氏染色阳性呈紫色，细菌芽胞孔雀绿着色。

嗜热脂肪芽孢杆菌比较容易识别且对人体没有危害性，一般作为空间消毒的指示生物。嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢是对湿热压力蒸汽灭菌抗力最强的芽孢。也就是说，制备压力蒸汽灭菌生物指示剂需要嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢作为染菌菌种。

然而，在工业化生产中，嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢生成率低，制备周期长，难以满足生物指示剂制备所需芽孢数量。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明旨在提供一种快速制备嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的技术方案。为了完成该目的，本发明提供以下技术方案：

本发明第一方面提供一种嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢的制备方法，包括以下步骤：

（1）菌种活化：用PBS缓冲液将嗜热脂肪地芽孢杆菌菌株G. stearothermophilusATCC 7953冻干粉制备成菌悬液，涂布于活化培养基上进行活化；

（2）菌种制备：将活化的菌种接种到增殖培养基，振荡培养10-20h；

（3）芽孢诱导：将菌种接种至诱导培养基中进行诱导培养，收集嗜热脂肪地芽孢杆菌菌体及芽孢，去除菌体后即得到嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢。

在本发明的一些具体实施方案中，所述PBS缓冲液1000mL体系如下：无水磷酸氢二钠2.83g，磷酸氢二钾1.36g，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2±0.2。

在本发明的一些具体实施方案中，所述活化培养基为TSA培养基，1000mL体系如下：胰蛋白胨15g，大豆蛋白胨5g，氯化钠5g，琼脂16g，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2±0.2；所述增殖培养基为TSB培养基，1000mL体系如下：胰蛋白胨17g，大豆蛋白胨3g，氯化钠5g，葡萄糖2.5g，无水磷酸氢二钾2.5g，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2±0.2。

在本发明的一些实施方案中，所述诱导培养基1000mL体系如下：胰蛋白胨3.0-12g，酸水解酪蛋白1.0-6.0g，酵母提取粉1.0-6.0g，牛肉浸粉1.0-6.0g，氯化钾10.0-60.0mg，氯化钙0.1-0.6g，氯化锰2.0-20.0mg，硫酸镁0.2-0.8mg，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2±0.2。

在本发明的一些具体实施方案中，所述诱导培养基1000mL体系如下：胰蛋白胨6.0g，酸水解酪蛋白胨3.0g，酵母提取粉3.2g，，牛肉浸粉2.5g，氯化钾32mg，氯化钙0.25g，氯化锰10.0mg，硫酸镁0.41g，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2-7.4。