[发明专利]一种产生菜籽甾醇的酿酒酵母工程菌及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 201911321376.1 | 申请日： | 2019-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN110903993A | 公开（公告）日： | 2020-03-24 |
| 发明（设计）人： | 郭庆春;孔建强;董志鹏;苑立刚;褚倩倩 | 申请（专利权）人： | 河北兰升生物科技有限公司;河北谷之润科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/53;C12N15/81;C12P33/00;C12R1/865 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 052260 *** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 产生 菜籽 酿酒 酵母 工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种产生菜籽甾醇的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述酿酒酵母工程菌含有甾醇Δ7-还原酶基因和葡萄糖脱氢酶基因。
2.根据权利要求1所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述甾醇Δ7-还原酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.根据权利要求1或2所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述甾醇Δ7-还原酶基因编码的甾醇Δ7-还原酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
4.根据权利要求1所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述葡萄糖脱氢酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
5.根据权利要求1或4所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述葡萄糖脱氢酶基因编码的葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
6.权利要求1～5任一项所述的酿酒酵母工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将甾醇Δ7-还原酶基因插入到pESC-Trp质粒中，得到pESCTrp-Δ7Red2质粒；
2)将葡萄糖脱氢酶基因插入到步骤1)得到的pESCTrp-Δ7Red2质粒中，得到pESCTrp-Δ7Red2-GDH质粒；
3)将所述步骤2)得到的pESCTrp-Δ7Red2-GDH质粒导入酿酒酵母中，得到酿酒酵母工程菌。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，扩增甾醇Δ7-还原酶基因使用的引物包括Fhis49398引物和Rhis49398引物；
所述Fhis49398引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述Rhis49398引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，扩增甾醇Δ7-还原酶基因使用的程序为：94℃2min；94℃20s，55℃30s，72℃1min，30个循环；72℃7min。
9.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，扩增葡萄糖脱氢酶基因使用的引物包括FBamH12276引物和RSal12276引物；
所述FBamH12276引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述RSal12276引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。
10.权利要求1～5任一项所述的酿酒酵母工程菌在制备菜籽甾醇中的应用。
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