[发明专利]制备青鳉鱼肠激酶活性亚基的方法、其产物和用途有效
申请号: | 201911326287.6 | 申请日: | 2019-12-20 |
公开(公告)号: | CN111197041B | 公开(公告)日: | 2022-08-19 |
发明(设计)人: | 孙航;张波;闵兆升;魏辰 | 申请(专利权)人: | 上海联合赛尔生物工程有限公司 |
主分类号: | C12N9/48 | 分类号: | C12N9/48;C12N15/70;C12N15/62;C07K19/00;C07K14/61;C12P21/06 |
代理公司: | 北京德琦知识产权代理有限公司 11018 | 代理人: | 潘怀仁;王珍仙 |
地址: | 201206 上海*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 制备 青鳉鱼 肠激酶 活性 方法 产物 用途 | ||
1.一种制备青鳉鱼肠激酶活性亚基的方法,所述方法包括下述步骤:
形成包括编码融合标签msyB的多核苷酸和编码青鳉鱼肠激酶活性亚基的多核苷酸的表达载体;
将所述表达载体转化至宿主菌中,得到转化的宿主菌;
培养所述转化的宿主菌,使其表达包含融合标签msyB的青鳉鱼肠激酶活性亚基;
将所述包含融合标签msyB的青鳉鱼肠激酶活性亚基分离和纯化;和
将纯化后的包含融合标签msyB的青鳉鱼肠激酶活性亚基进行酶切,得到所述青鳉鱼肠激酶活性亚基,
其中所述表达载体进一步包括编码将所述融合标签msyB与所述青鳉鱼肠激酶活性亚基连接的接头的多核苷酸,所述接头的氨基酸的序列如SEQ ID No:6中所示,
其中所述融合标签msyB的氨基酸的序列如SEQ ID No:4中所示,
其中所述青鳉鱼肠激酶活性亚基的氨基酸的序列如SEQ ID No:5中所示,并且
编码所述融合标签msyB的多核苷酸、编码所述接头的多核苷酸和编码所述青鳉鱼肠激酶活性亚基的多核苷酸在所述表达载体中依次连接。
2.根据权利要求1所述的方法,其中编码所述融合标签msyB的多核苷酸的序列如SEQID No:1中所示。
3.根据权利要求1所述的方法,其中编码所述青鳉鱼肠激酶活性亚基的多核苷酸的序列如SEQ ID No:2中所示。
4.根据权利要求1所述的方法,其中编码所述接头的多核苷酸的序列如SEQ ID No:3中所示。
5.根据权利要求1所述的方法,其中所述载体为pET-28a、pET-28b或pET-28c。
6.根据权利要求1所述的方法,其中所述宿主菌为带λDE3的溶源菌。
7.根据权利要求6所述的方法,其中所述宿主菌为大肠杆菌菌株BL21(DE3)。
8.根据权利要求1所述的方法,其中所述酶切用肠激酶进行。
9.根据权利要求8所述的方法,其中所述肠激酶选自牛肠激酶或青鳉鱼肠激酶。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法制备的青鳉鱼肠激酶活性亚基。
11.根据权利要求1-9中任一项所述的方法制备的青鳉鱼肠激酶活性亚基在特异性酶切具有DDDDK序列的蛋白质中的用途。
12.根据权利要求11所述的用途,其中所述具有DDDDK序列的蛋白质为Trx-rhGH融合蛋白。
13.一种融合蛋白,所述融合蛋白具有如SEQ ID No:10中所示的氨基酸序列。
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