[发明专利]一种全血的免疫发光分析用稀释液及其分析方法

说明书

本发明公开了一种全血的免疫发光分析用稀释液，所述稀释液中各组分的质量浓度为：PBS 5～20mmol/L、BSA 0.1％～1％、PC‑300 0.01％～0.1％、分散剂0.01％～0.5％。通过取全血的免疫发光分析用稀释液、校准品、偶联有PCT抗体的磁微粒混悬液依次加入反应管中，振荡混匀，37℃孵育10～30min，分离，清洗，将洗涤后的反应容器继续加入吖啶酯标记物继续孵育12min，分离，清洗，在全自动发光仪中进行测试可进行全血的免疫发光分析。本发明的有益效果为：加入样本稀释液，并在样本稀释液中加入分散剂，分散剂可使抗原和抗体充分反应，其发光值较不加分散剂有了很大的提高且CV变化不大。

技术领域

本发明涉及一种免疫发光分析用稀释液及其分析方法，具体涉及一种全血的免疫发光分析用稀释液及其分析方法，属于免疫检测分析技术领域。

背景技术

目前化学发光免疫分析方法中检测的样本基本都是血清，而血清要等血液凝固后才能更好地进行分离，血液凝固一般是在4℃放置几个小时甚至更长的时间，血液凝固之后经过3～4次离心分离才能得到血清。因而过程比较繁琐且费时。对于婴幼儿炎症检测等项目来说，快速有效地检测出结果可减少婴儿的痛苦。本发明采用全血标本，采用全血可以大大缩短前期血清处理时间，标本周转时间短，操作简单化。目前市场上也有用POCT实现全血的检测，其优点是可以在患者身边实现即时检测，并快速取得诊断结果，但其实施中存在以下问题：检测结果不准确，重复性差，且一般用于定性检测，无法获得相对准确的检测结果且由于试剂和仪器的特殊性，检验费用增加。

发明内容

有鉴于此，本发明采用统计学的方法先对全血中血球压积进行统计分析，然后做出血清的校准曲线，之后调整全血中稀释液的成分，对全血的校准曲线进行校正拟合，并与血清校准曲线进行换算，得到所测抗原或抗体的量。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种全血的免疫发光分析用稀释液，所述稀释液中各组分的质量浓度为：PBS5～20mmol/L、BSA0.1％～1％、PC-3000.01％～0.1％、分散剂0.01％～0.5％。

优选的，所述分散剂为N-十二烷基-N，N-二甲基氨基丙磺酸盐、十烷基二甲基氧化铵、十六烷基醚羟丙基羧酸甜菜碱、十六烷基聚氧乙烯醚羟丙基羧酸甜菜碱中的一种或多种。

本发明全血的免疫发光分析用稀释液，组分中加入分散剂，可以使全血得到充分稀释从而使抗原与抗体充分反应，其发光值较不加分散剂有了很大的提高且CV变化也不大。

本发明还提供了以上述全血的免疫发光分析用稀释液进行全血的免疫发光分析方法，步骤如下：

(1)偶联有PCT抗体的磁微粒混悬液的制备

(11)取一定量的羧基磁微粒于硅化离心管中，加入200～500μLpH值为5.0～6.5、浓度为0.05～0.2mol/L的MES缓冲液，涡旋混匀，置于磁力架上，静置5min使所述羧基磁微粒与所述MES缓冲液分离，弃去上清，重复上述步骤3次后加入200～500μLpH值为5.0～6.5、浓度为0.05～0.2mol/L的MES缓冲液重悬羧基磁微粒；

(12)再加入20～200μL4℃的浓度为10～200mg/mL的EDC偶联试剂，于旋转反应器上涡旋，室温孵育15～40min；

(13)孵育后去除上清液，用0.1MMES缓冲液清洗1次；

(14)清洗后加入150μLMES缓冲液重悬羧基磁微粒，加入10～100μg降钙素原PCT抗体，混匀，室温反应2～4h；

(17)之后加入0.1～5mL封闭缓冲液进行封闭，时间为1～5h；

(18)封闭后去上清，加入600μL清洗缓冲液洗涤3次，得到偶联有PCT抗体的磁微粒混悬液，置于1.5mL浓度为2mg/mL的保存液中，2～8℃保存备用；