[发明专利]一种分离组织特异来源细胞外囊泡的方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种从生物体液中分离甲状腺转录因子1阳性的细胞外泌体的方法，包括：

步骤1)根据细胞外泌体的物理参数，对所述生物体液通过物理方法分离获得总细胞外泌体；

步骤2)使用红细胞和/或白细胞通用的结合剂与所述总细胞外泌体接触，除去被结合剂结合的红细胞和/或白细胞源的细胞外泌体；

步骤3)使用特异性结合甲状腺转录因子1的结合剂进一步正向捕获，得到结合剂-细胞外泌体复合物；

其中所述结合剂-细胞外泌体复合物直接用于释放出细胞外泌体，其中所述细胞外泌体为肺或甲状腺来源的外泌体。

2.根据权利要求1的方法，其中所述物理方法为尺寸排阻色谱、密度梯度离心、差速离心、纳米膜超滤、微流体分离。

3.根据权利要求1的方法，其中所述红细胞和/或白细胞通用的结合剂是结合选自GPA、CD45、CD16、CD19、CD3、CD50、CD69的一种或多种生物标记的一种或多种结合剂。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述结合剂为抗体或其抗原结合片段。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述抗体为合成抗体。

7.根据权利要求4所述的方法，其中所述抗体为单链抗体。

8.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述结合剂是单克隆抗体。

9.根据权利要求1-3任一项的方法，其中所述结合剂可以与固体表面或载体直接或间接相连。

10.根据权利要求9的方法，其中所述固体表面或载体选自颗粒物、膜、柱、磁珠、树脂及其任意组合。

11.根据权利要求1-3任一项的方法，其中所述生物体液包括：血液、血清、血浆、尿、痰、腹水、唾液、支气管肺泡灌洗液、泪液、口咽洗液、排泄物、腹水液、胸腔积液、眼泪、心包液、淋巴液、食物糜、胆汁、粪便、细胞培养上清液、乳汁或其任意组合。

12.根据权利要求1-3任一项的方法，其中所述结合剂用磁性、荧光或放射性标记进行标记。

13.根据权利要求1-3任一项的方法，其还包括在步骤3)之后去除复合物上非特异吸附的细胞外泌体的步骤。

14.根据权利要求13的方法，其中所述去除复合物上非特异吸附的细胞外泌体的步骤为用洗涤缓冲液洗涤以去除非特异吸附的细胞外泌体。

15.根据权利要求1-3任一项的方法，其中通过用洗脱缓冲液洗脱所述结合剂-细胞外泌体复合物释放细胞外泌体。

16.权利要求9所述的方法，其中所述载体为磁珠或树脂。

17.权利要求16所述的方法，其中磁珠浓度为1*10⁷个/ml至1*10⁸个/ml；和/或所述树脂浓度为1*10⁶个/ml至1*10⁷个/ml。

18.权利要求16所述的方法，其中磁珠浓度为3*10⁷个/ml，和/或所述树脂浓度为5*10⁶个/ml。

19.权利要求9所述的方法，其中所述结合甲状腺转录因子1的结合剂为抗甲状腺转录因子1的抗体。