[发明专利]一种不含胆固醇的薯蓣皂苷元-阿糖胞苷脂质体及其制备方法

权利要求书

1.一种不含胆固醇的薯蓣皂苷元-阿糖胞苷脂质体及其制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1，薯蓣皂苷元-琥珀酸酯(DG-SA)聚合物的合成

(1)取薯蓣皂苷元(DG)，溶于无水甲苯，摇匀，取琥珀酰酐加入到上述薯蓣皂苷元甲苯溶液体系，摇匀，取4-二甲基氨基吡啶(DMAP)，加入到上述所得的薯蓣皂苷元、琥珀酰酐甲苯溶液体系中，搅拌混匀后，80℃水浴下回流反应直至DG反应消耗完；

(2)将上述反应体系冷却至室温，用蒸馏水处理，并采用乙酸乙酯萃取3-5次，合并提取物；

(3)分别依次采用2N盐酸溶液、蒸馏水、和饱和氯化钠溶液洗涤上述所得的提取物，再用无水硫酸镁进行干燥处理，过滤以除去沉淀；

(4)上述所述滤液在真空条件下浓缩，得到薯蓣皂苷元-琥珀酸酯(DG-SA)粗品，然后利用己烷-乙酸乙酯体系重结晶，得到白色薯蓣皂苷元-琥珀酸酯(DG-SA)粉末；

步骤2，薯蓣皂苷元-阿糖胞苷(DG-Ara-C)聚合物的合成

(1)取上述步骤所得的薯蓣皂苷元-琥珀酸酯(DG-SA)溶于无水二氯甲烷，摇匀，取N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)加入上述的DG-SA溶液体系，摇匀，取N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)，加入上述所得的DG-SA及DCC二氯甲烷溶液体系，充分混匀，冰浴6小时后，反应体系于室温静置24小时；

(2)上述反应体系过滤以除去沉淀，滤液中含有活化的DG-SA，滤液浓缩后用于后续反应；

(3)取阿糖胞苷溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，摇匀，预热后加入到上述活化的DG-SA溶液体系中，在氮气的保护下于室温反应48小时；

(4)所得的反应体系于真空条件下除去溶剂，并采用闪蒸层析进行纯化，采用甲醇-三氯甲烷溶液体系进行洗脱，得到薯蓣皂苷元-阿糖胞苷(DG-Ara-C)聚合物的；

步骤3，不含胆固醇的薯蓣皂苷元-阿糖胞苷(DG-Ara-C)聚合物的脂质体的制备

(1)取二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)和薯蓣皂苷元-阿糖胞苷(DG-Ara-C)聚合物，溶于氯仿/甲醇混合液中，摇匀直至完全溶解，经减压旋转蒸发除去氯仿和甲醇，至瓶壁上形成一层薄膜，置于真空冷冻干燥箱内过夜，除去痕量残留氯仿和甲醇；

(2)将10％的磷酸缓冲液溶液(PBS)加入至成膜的圆底烧瓶中，50℃，99rpm/min水浴振荡条件下水化60分钟；

(3)上述所得溶液，在冰浴条件下用细胞超声仪超声处理15分钟后，离心或用孔径为0.45μm的滤膜过滤处理，即可得到粒径相对均一的不含胆固醇的薯蓣皂苷元-阿糖胞苷(DG-Ara-C)聚合物的脂质体。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1的(1)中薯蓣皂苷元(DG)消耗反应程度的检测方法是薄层色谱分析法(EA/H＝1:6,R_f＝0.27)。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤3的(1)中脂质体的膜材中与传统脂质体最大的区别是不含有胆固醇，由薯蓣皂苷元-阿糖胞苷(DG-Ara-C)聚合物的DG部分发挥其作用。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤3的(1)中减压旋转蒸发条件：水浴锅温度：45℃，压力50Pa，时间60分钟。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤3的(1)中减压旋转蒸发条件：水浴锅温度：45℃，压力50Pa，时间60分钟。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤3的(3)中超声粉碎仪超声功率：75W，工作5秒停5秒。

7.根据权利要求1所述的方法在制备抗癌药物的给药载体构建中的应用。