[发明专利]基于驼源Fc片段的免疫原的制备及应用

权利要求书

1. 一种基于驼源Fc片段的免疫原，所述的免疫原由目的蛋白与驼源Fc片段融合而成，其特征在于，所述的驼源Fc片段如SEQ ID NO:17-22中的任意一条所示；所述目的蛋白为人源IL-13蛋白。

2. 根据权利要求1所述的一种基于驼源Fc片段的免疫原，其特征在于，所述驼源Fc片段的编码序列分别如SEQ ID NO:23-28中的任意一条所示。

3. 基于驼源Fc片段的免疫原的表达载体，其特征在于，所述的表达载体包括5’-多克隆位点（MCS）-连接区（linker）编码序列-驼源Fc编码序列-6个组氨酸（6×His）编码序列-3’的序列；所述连接区（linker）编码序列-驼源Fc编码序列如SEQ ID NO: 23-28中的任意一条所示；人源IL-13蛋白的编码序列插入驼源Fc蛋白表达载体的多克隆位点。

4.权利要求3所述的基于驼源Fc片段的免疫原的表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）驼源Fc蛋白编码序列的获得；

2）构建驼源Fc蛋白表达载体；

3）将人源IL-13蛋白的编码序列插入驼源Fc蛋白表达载体的多克隆位点；

步骤1）具体为：分离内蒙古阿拉善双峰驼外周血中的PBMCs；提取总RNA，通过逆转录试剂盒将总RNA进行反转录成cDNA；通过基因特异性引物SEQ ID NO: 1- SEQ ID NO: 10对反转录后的cDNA进行PCR反应，得到5种PCR产物；

步骤2）具体为：通过引物SEQ ID NO: 11、16，SEQ ID NO: 12、16，SEQ ID NO: 13、16，SEQ ID NO: 14、16，SEQ ID NO: 15、16分别对步骤1）得到的5种PCR产物进行PCR扩增，得到如SEQ ID NO:23-28所示的6种DNA序列，然后通过合适的酶切位点将6种DNA序列酶切；将结构为5’-多克隆位点（MCS）-连接区（linker）编码序列-驼源Fc编码序列-6个组氨酸（6×His）编码序列-3’的酶切产物克隆到载体中。

5.权利要求1或2所述的基于驼源Fc片段的免疫原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）采用权利要求4的方法构建基于驼源Fc片段的免疫原的表达载体；

2）将表达载体转染真核细胞，以实现人源IL-13蛋白与驼源Fc蛋白构成的融合蛋白的表达。

6. 驼源Fc片段在制备免疫原中的应用，其特征在于，所述的免疫原由人源IL-13蛋白与驼源Fc片段融合而成，所述的驼源Fc片段如SEQ ID NO:17-22中的任意一条所示；所述的免疫原用于免疫骆驼。

7.权利要求1或2所述的基于驼源Fc片段的免疫原在制备针对人源IL-13蛋白的单域抗体中的应用。