[发明专利]构建侧翼已知序列的测序文库的引物组和方法

权利要求书

1.一种引物组，其特征在于，包括：第一组引物和第二组引物，

所述第一组引物包括第一引物和第二引物，沿5’端到3’端方向，所述第一引物包括第一特异性序列、第一间隔固定序列以及第一随机序列，所述第二引物包括第二特异性序列、第二间隔固定序列以及第二随机序列，所述第一特异性序列与双链DNA中第1链上5’端已知序列匹配，所述第二特异性序列与所述双链DNA中第2链上5’端已知序列匹配，所述第一间隔固定序列与所述双链DNA中第1链不匹配，所述第二间隔固定序列与所述双链DNA中第2链不匹配；

所述第二组引物包括第三引物和第四引物，所述第三引物的3’端为所述第一间隔固定序列，所述第四引物的3’端为所述第二间隔固定序列。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述第一间隔固定序列和第二间隔固定序列为接头序列；

所述第三引物和第四引物的5’端包括文库标签序列和文库标签测序引物结合序列。

3.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述已知序列的长度为18～30nt，所述第一间隔固定序列和第二间隔固定序列的长度分别为18～30nt，所述第一随机序列和第二随机序列的长度分别为6～15nt。

4.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有容器以及位于所述容器中的权利要求1～3任一项所述的引物组。

5.一种构建侧翼已知序列的测序文库的方法，其特征在于，包括：

利用第一组引物对侧翼已知序列进行第一轮PCR扩增，以便得到第一扩增产物；

利用第二组引物对所述第一扩增产物进行第二轮PCR扩增，以便得到侧翼已知序列测序文库，

其中，所述第一组引物与第二组引物是如权利要求1～3任一项所述引物组中所限定的。

6.一种测序文库，其特征在于，所述测序文库是利用权利要求5所述的方法制备的。

7.权利要求6所述测序文库的用途，其特征在于，用作高通量测序平台的文库。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述高通量测序平台选自MGI测序平台、Illumina测序平台或proton测序平台。