[发明专利]一种检测生殖支原体的引物和探针、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测生殖支原体的引物和探针，其特征在于，包括：

SEQ ID NO:1～2所示核苷酸序列的引物对和SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针。

2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团FAM，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1。

3.检测生殖支原体的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的引物和探针。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于检测内参基因的SEQ ID NO:4～5所示核苷酸序列的引物和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针。

5.根据权利要求4所述的试剂盒针，其特征在于，SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团ROX，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2。

6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括反应液1和反应液2；所述反应液1包括基础缓冲液、阳离子、增强剂和酶；所述反应液2包括ProClin300和MnCl₂。

7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述基础缓冲液为含BSA的Tris-HCl缓冲液，所述阳离子为Mn²⁺、K⁺中的一种或两种，所述增强剂包括甘油、DMSO、Tween 20、Tricine X-100、乙酸钾和甜菜碱中的一种或多种，所述酶为双功能DNA聚合酶和/或UNG酶。

8.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括阴性质控品和阳性质控品；所述阴性质控品为含人β珠蛋白基因片段的质粒，所述阳性质控品包括含MG外膜蛋白B基因片段的质粒和人β珠蛋白基因片段的质粒。

9.一种生殖支原体的检测方法，其特征在于，包括：利用权利要求3～8任一项所述的试剂盒，对待测样品DNA进行实时荧光定量PCR检测，产生S型扩增曲线则为阳性。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的体系包括：

总体积为50μL；

所述实时荧光定量PCR的程序包括：

50℃2分钟；

96℃2分钟预变性；

96℃6秒→60℃15秒，共45个循环。